异泽兰黄素抑制食管癌细胞te1增殖的分子机制研究

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1、万方数据AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterTheMechanismsResearchofEupatilinInhibitingProliferationofHumanEsophagealCancerCellTElByXiaonaWangSupervisor：Prof．MingyaoZhaoProf．KangdongLiuPathologyandPathophysiologyBasicalMedicSchool，ZhengzhouUniversityMay，2014万方数

2、据学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位敝储啪脚为蛑多肌日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分

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4、细胞信号转导通路将为食管癌的诊断和治疗提供新的靶点。针对食管癌发生发展过程中特定靶点或几个靶点联合的干预将为食管癌的治疗提供新的思路。异泽兰黄素来源于艾属植物种，它是一种有效的黄酮成分，分子结构为5,7．二羟基-3，4，6-三甲基黄酮。已有研究表明，异泽兰黄素具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤活性和细胞保护活性，但是异泽兰黄素发挥生物活性的机制及其对食管癌的作用尚不清楚。本研究拟通过体外培养细胞增殖、细胞软琼脂克隆形成、流式细胞技术和蛋白印迹等实验技术，探讨异泽兰黄素通过何种机制抑制TEl的增殖，以期为食管癌变早期化学干预提供实验依据。材料与方法1．通过细胞

5、毒性实验检测不同浓度(O、3．125、6．25、12．5、25、50jaM)的异泽兰黄素对食管癌细胞TEl是否有毒性效应。2．通过细胞增殖实验得出不同浓度(0、2．5、5、10、20、40gM)的异泽兰黄素在不同时间(O、24、48、72、96h)对食管癌细胞TEl的抑制作用。3．通过细胞软琼脂克隆形成实验观察不同浓度(0、2．5、5、10、20、40gM)异泽兰黄素对食管癌细胞TEl的克隆形成能力的影响。4．食管癌细胞TEl经过不同浓度的异泽兰黄素处理24h后，用流式细胞技术检测异泽兰黄素对食管癌细胞TEl细胞周期的影响。万方数据摘要5．通过蛋白

6、质印迹法来检测异泽兰黄素作用于食管癌细胞TEl细胞的AKT-GSK3]3和MAPK／ERK信号通路变化。结果1．异泽兰黄素对食管癌细胞TEl的毒性作用通过不同浓度的异泽兰黄素作用于食管癌细胞TEl24、48h，测出细胞存活率OD值曲线，异泽兰黄素作用于食管癌细胞IC50处的浓度约为409M，依次往下形成浓度梯度：0、2．5、5、10、20、40uM做下一步的实验。2．异泽兰黄素可以抑制食管癌细胞TEl细胞的增殖与对照组相比，异泽兰黄素抑制食管癌细胞TEl的增殖(尸_<0．05)，并呈时间和剂量依赖性。3．异泽兰黄素抑制TEl细胞软琼脂克隆形成与对照

7、组相比，不同浓度的异泽兰黄素均能减少TEl细胞的克隆数(P<0．05)，并且随着异泽兰黄素作用浓度的增高，TEl细胞克隆数呈下降趋势(氏O。05)。4．异泽兰黄素通过阻滞细胞周期G1期来抑制TEl的增殖结果显示，与对照组相比，随着异泽兰黄素作用于食管癌细胞TEl浓度的增高，G1期比例也呈现增高趋势(P

8、5)；异泽兰黄素也可以抑制MAPKJERK信号通路，降低该通路中磷酸化ERK水平(p：O．05)。结论1．异泽兰黄素通过阻