南极菌pseudoalteromonas sp.nj21产琼胶酶的研究

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1、万方数据StudyOilAntarcticbacteriumPseudoalteromonassp．NJ21productingAgarase(趸ngdaoAgriculturalUniversity工nFulfilImentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofAgronomyXuYuall(DepartmentofAgronomy)Supervisor：LiYuquanQingdao．ChinaJune，2013万方数据独创性声’明

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4、IIIlY2663179本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得青岛农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名弦限帆Ⅵ年6胁日关于论文使用授权的说明本人完全了解青岛农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影

5、印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意青岛农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研究生虢弦限帆“年石月；。日翩鳜参勺帆Ⅵ年㈣p日万方数据青岛农业大学硕士学位论文摘要南极菌Pseudoa]teromonassp．NJ21产琼胶酶的研究摘要琼胶酶是一种重要的海藻多糖降解酶，琼胶酶降解琼胶形成的琼寡糖具有抗肿瘤、抗氧化、增强免疫等生理活性；作为工具酶，其在海藻原生质体的制各以及分子生物学实验中都具有重要的应用。琼胶降解菌分布很广，主要存在于海洋中，土壤、淡水中较少。海洋

6、生态环境复杂，特别是极地海洋环境中的微生物由于高盐度、高辐射、低温、反复冻融及特殊的光照特征可能使海洋微生物的遗传结构和生理习性发生适应性的改变，能够产生各种具有新颖生理活性的酶系。因而于极地海洋微生物中分离获得的琼胶酶可能具有独特的降解活性和更高的催化效率，具有潜在的开发应用前景。本研究以南极菌株为对象，对实验室中保存的南极采集的微生物资源进行系统的分离，396株菌中共筛选得到59株产琼胶酶的菌株。在产琼胶酶菌株中对其进行高产菌株的筛选、发酵条件的培养优化、琼胶酶的分离纯化、酶学性质及其降解产物的研究。

7、从中筛选出一株高效产琼胶酶的菌株NJ2l，通过16SrDNA分析鉴定菌株N32l属于Pseudoalteromonassp．属。利用单因素实验确定培养基的碳源、氮源、金属无机盐、培养温度、起始pH值分别为D一甘露糖69／L、蛋白胨79／L、CaCl：6mmol／L、15"C、pH8．0，通过CCD响应面法实验最终确定培养基的最佳组成和配比为D一甘露糖，5．529／L：蛋白胨，7．49／L；CaCl：，5。84mmol／M最佳发酵温度为15℃。此时，发酵液酶活力比优化之前提高了6．36倍。之后利用实验级切向

8、流浓缩仪器对菌液进行浓缩，得到分子大小在30kDa—lOOkDa之间的粗酶液，经Sephacryl$一100凝胶柱进一步纯化，收集得到一个具有琼胶酶活性的组分。经过SDS—PAGE呈现一条清晰的带，分子量为80kDa。对该纯化酶进行酶学性质研究发现：该酶最适反应温度是40。C，酶的热稳定性比较差，超过40"C即使是在40℃该酶的酶活力随时间下降迅速；该酶的最适反应pH为8．0，过酸或过碱都会使酶活下降，甚至失活；Ca2+对该酶有促进作用，其他离子均对该酶有一定程度的抑制作用，以Mn2+最为显著；琼脂底物浓

9、度为O．5％时酶活力最高。利用琼胶酶酶解浓度为o．2％的琼胶底物，获得相应的降解产物，对其进行TLC薄层层析检测获得2个寡糖组分，并得出结论酶的降解产物为新琼四塘和新琼六糖。关键词：南极菌；琼胶酶；培养优化；分离纯化；酶学性质万方数据青岛农业大学硕士学位论文StudyonAntarcticbacteriumPseudoalteromOTlaSsp．NJ21productingAgaraseAbstractTheagaraseisallimportantseaweedpolysaccharidedegrad

10、ingenzyme．Theagaro-oligosaccharidesformedbyagarenzymaticdegradationhaveanti-tumor,anti-oxidation,enhancetheimmuneandotherphysiologicalactivity,andastoolenz3qne，agaro—oligosaccharideshaveimportantapplicationsonthesea