前列腺癌雄激素非依赖性转化过程中甲基化基因的筛选与初步研究

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1、万方数据论文题目：茴互!』腿疸雄邀塞韭依戆：眭鞋化过程生里基化基国的筮选当初生研究答辩委员会主席：答辩委员会成员：盟LLL避型太十<

2、太三堂型盈盐筮医一匡医一医一直旦盟盟盟赳生温一温一遏温一一援援援援援垫塾塾数塾一德一盈龌斌一生盈墓灶一尘万方数据温州医科大学硕士学位论文目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．3弓l言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．5’lij⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··J材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．7结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22，J、结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯29致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30综述及参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．43万方数据温州医科大学硕士学位论文前列腺癌雄激素非依赖性转化过程中甲基化基因的筛选与初步研究中文摘要目的初步筛选前列腺癌雄激素非依赖性转化过程中差异甲基化基因，为探讨甲基化改变在雄激素非依赖性转化机制中可能发挥的作用奠定基础。方法1．本实验以雄激素依赖性前列腺癌(Androgen-DependentProstateCancer，ADPC)LNCaP细胞为实验的对照组，无雄激素环境中培养的雄激素非依赖性前列腺癌(Androgen-Inde

5、pendentProstateCancer，AIPC)LNCaP细胞即LNCaP．AI(androgenindependent)细胞为实验组，两组细胞于37℃，5％C02培养箱中培养，平均三天换培养液一次，六天传代一次。2．应用全基因组DNA甲基化芯片(HumanMethylation27Beadchip)杂交技术以及转录组RNA测序技术，检测雄激素依赖性前列腺癌细胞株LNCaP和雄激素非依赖性前列腺癌细胞株【NCaP．Aj中的差异甲基化基因。3．采用重亚硫酸盐测序PCR(bisulfitegenomicsequencingPCR，

6、BSP)联合TA克隆测序检测雄激素依赖性前列腺癌细胞株LNCaP和雄激素非依赖性前列腺癌细胞株LNCaP．AI中生长因子受体结合蛋白10(Growthfactorreceptor．boundprotein10，GRBIO)和B细胞性淋巴瘤／白血病一2基因(B．celllymphoma／leukaemia-2gene，BCL一2)的甲基化状态。结果1．发现与LNCaP细胞株相比，LNCaP-AI细胞株有990个CpG位点表现为高甲基化，涉及855个基因；2305个CpG位点表现为低甲基化，涉及1970个基因。结合转录组RNA表达结果，

7、筛选出6个超甲基化基因：FAMIllB、RAB36、PC鲫7、COL6A2、1GFIR、GULPl；10个低甲基化基阻：EPm3、TM4SFl、lGFBP5、FAMl05．4、RASDi、lTPR2、CYP27Bl、GRBIO、BCL．2、UBE2E3。这些差异甲基化基因涉及钙离子信号通路、Wnt信号通路等多个信号通路，参与细胞的基因表达、信号传导、细胞通讯、细胞运动、细胞粘附以及血管生成等功能。2．GRBIO基因在LNCaP．AI细胞和LNCaP细胞中的甲基化率分别为9．6％、7．4％；BCL．2基因在LNCaP．AI细胞和LNC

8、aP细胞中的甲基化率分别为14．7％、25．3％，这两个基因在LNCaP细胞和LNCaP．AI细胞的甲基化率无明显差别(P>0．5)。万方数据温州医科大学硕士学位论文结论本研究筛选出大量与雄激素非依赖性前列腺癌相关的异常甲基化基因，为探讨这些差异甲基化基因在前列腺癌雄激素非依赖性转化过程中发挥的作用奠定基础。进一步研究发现GRBIO和BCL．2基因的异常表达与基因甲基化无明显相关，而二者是否参与到前列腺癌激素非依赖性到转化过程以及具体机制有待进一步研究。关键词雄激素非依赖性前列腺癌：DNA甲基化；DNA甲基化芯片；转录组测序；亚硫酸

9、氢钠修饰PCR；TA克隆万方数据温州医科大学硕士学位论文ScreeningandStudyingofMethylatedGenesintheProgressionfromAndrogen—dependenttoAndrogen—ind