雄激素非依赖性前列腺癌中雄激素受体的功能研究

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1、温州医学院硕士学位论文雄激素非依赖性前列腺癌中雄激素受体的功能研究姓名：韩秀翠申请学位级别：硕士专业：临床检验诊断学指导教师：陶志华2012-05-17雄激素非依赖性前列腺癌中雄激素受体的功能研究中文摘要目的探讨雄激素受体在雄激素非依赖性前列腺癌细胞中所起的功能。方法倒置显微镜下观察雄激素依赖性的前列腺癌LNCaP细胞和雄激素非依赖性的前列腺癌LNCaP—AI和LNCaP—AI+F细胞的形态，用CCK8比色分析法检测三株细胞的增殖能力，实时荧光定量PCR技术检测ARmRNA的表达，WestemBlotting检测AR蛋白的表达，

2、并同时观察其对雄激素双氢睾酮和雄激素拮抗物氟他胺的反应性，所得结果均与LNCaP细胞比较。构建重组质粒PLKO．1．AR-shRNA，转染至此三种细胞，与转染PLKO．1载体组比较。利用实时荧光定量PCR技术观察转染完成后24小时shRNA对AR基因mRNA表达的影响，用CCK8比色分析法测定细胞增殖活性，并在转染完成后细胞生长差异最明显的时间(LNCaP细胞和LNCaP．AI+F细胞转染后48小时，LNCaP．AI细胞转染后72小时)对AR蛋白的表达做WesternBlotting分析。结果AR干扰之前，相对于LNCaP细胞，

3、LNCaP．AI细胞和LNCaP．AI+F细胞的增殖能力都明显增强，且后者增殖能力更强；LNCaP．AI细胞的ARmRNA和蛋白的表达相对于LNCaP细胞都有明显的上升，而LNCaP．AI+F细胞ARmRNA和蛋白的表达相对于LNCaP细胞出现了明显的下降。转染24小时后LNCaP细胞、LNCaP．AI细胞和LNCaP．AI+F细胞的AR基因mRNA的干扰效率分别为42％、54％和56％。提示，在这三种不同的细胞中PLKO．1．AR．shRNA对AR基因有一定的抑制作用。CCK8检测结果发现，48小时，LNCaP细胞和LNCaP

4、．AI+F细胞的细胞生长抑制率分别为22％和32％；72小时，LNCaP．AI细胞的细胞生长抑制率为27％。干扰前后三株细胞对双氢睾酮和氟他胺的反应敏感性不一致：(1)AR干扰操作前，LNCaP细胞随着氟他胺浓度的增高，细胞生长有逐渐被抑制的趋势并且随着双氢睾酮浓度的增大，细胞生长呈现逐渐被促进的趋势；LNCaP．AI细胞对双氢睾酮敏感，但细胞的生长仅被高浓度的氟他胺抑制；LNCaP．AI+F细胞对双氢睾酮和氟他胺的反应性均较差；(2)AR干扰操作后，三株细胞对双氢睾酮和氟他胺反应性明显低于AR干扰前。另外，细胞干扰后Weste

5、rnBlotting结果显示存活的单个细胞内AR的表达与原始表达量相似。温州医学院硕士学位论文结论PLKO．1．AR-shRNA对AR基因的表达产生了抑制作用，结合干扰后细胞的生长情况和WesternBlotting结果，提示AR表达被干扰的细胞可能发生了凋亡反应。并且在这三株细胞的生长中AR都起到了不同程度的促进作用。可见，雄激素依赖性细胞系LNCaP的生长需要雄激素和雄激素受体，而雄激素非依赖性细胞亚系LNCaP．AI和LNCaP．AI+F生长虽对雄激素依赖性下降，但仍然需要雄激素受体。对于雄激素非依赖性的LNCaP．AI+

6、F，雄激素可能对细胞的生长没有促进作用。关键词前列腺癌；雄激素受体；雄激素非依赖；RNA干扰温州医学院硕士学位论文StudyontheFunctionofAndrogenReceptorinAndrogen—independentProstateCancerAbstractobjectiveToexplorethefunctionofandrogenreceptorinandrogen-independentprostateCanCer．MethodsToobserveandrogen—dependentprostatecanc

7、erUNCaPcellandandrogen—independentprostatecancerUNCaP-AIandUNCaP-AI+Fcellsmorphologyunderinvertedmicroscope．Then．threecellsproliferationwereassayedwithCCK8kit．Real—timequantitativePCRandWesternBlottingwereusedtodetecttheexpressionofARrnRNAandprotein．Also，weobservethe

8、reactivityofthethreecellstodihydrotestosteroneandflutamide．TheresultswerecomparedwiththatinLNCaPcell．ARshRNAwereinsertedintoPLKO．1v