雄激素非依赖性前列腺癌pc-3细胞中sfrp-1基因甲基化情况及三氧化二砷去甲基化的研究

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1、中图分类号密级雄激素非依赖性前列腺癌PC．3细胞中SFRP．1基因甲基化情况及三氧化二砷去甲基化的研究ArsenictrioxideandSFI冲一1genemethylationinandrogen—independentPC一3prostatecancercells计：学位论文：38页表格：5个插图：6幅郑磊指导教师：姜涛教授申请学位级别：硕士学位学科(专业)：外科学培养单位：大连医科大学附属第一医院完成时间：二O一三年四月答辩委员会主席：独创性声明IYIIIIIIl2llIl3llIIIlllll2

2、lIlloIIJIIl4IIJIl2llIlll本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：兰盟年』巳月笪目关于学位论文使用授权的说明本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关

3、部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权大连医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于(请在以下相应方框内打“√”)：作者签名：导师签名：1．保密口，在年解密后适用本授权书。2．不保密口。铲霭L铴‘日期：砌年q-月谚日日期：矽侈年华月28日签字日期：丝!三年jL月j堑日目录一、摘要⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一1(一)中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(二)

4、英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3二、正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5(一)前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5(二)材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯61．实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯61。1细胞系⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯61．2主要药品与试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯61．3主要仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯82．实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯82．1人雄激素非依赖性前列腺癌PC．3细胞的培养

5、⋯82．2实验分组⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯92．3CK8⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯92．4流式细胞术⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯102．5亚硫酸氢盐测序法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯102．6免疫荧光⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．122．7荧光定量PCR⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯132．8WesternBlot⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯152．9统计学分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18(三)结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯181．三氧化二砷对PC．3细胞增殖的

6、影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯182．三氧化二砷对PC．3细胞凋亡的作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯193．PC．3细胞中SFRP．1甲基化状态的BSP测序分析⋯⋯⋯194．免疫荧光分析PC．3细胞中SFRP一1的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯205．三氧化二砷处理前后SFRP．1mRNA表达的情况⋯⋯⋯206．三氧化二砷处理前后SFRP．1蛋白的表达情况⋯⋯⋯⋯21(四)讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22(五)结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24(六)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25三、文献

7、综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28(一)综述正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28(二)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34四、致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯38大连医科大学硕士学位论文雄激素非依赖性前列腺癌PC一3细胞中SFRP一1基因甲基化情况及三氧化二砷去甲基化的研究硕士生姓名：指导教师：专业名称：郑磊姜涛教授外科学摘要目的：近年来研究发现，DNA甲基化是肿瘤发生发展的重要机制之一。DNA甲基化常发生于抑癌基因启动子区(CpG岛)，通过抑制启

8、动子功能使抑癌基因表达沉默，导致肿瘤发生。本实验通过对雄激素非依赖性前列腺癌PC．3细胞中SFRP．1基因启动子甲基化的研究，来探讨SFRP．1启动子甲基化与前列腺癌的关系及三氧化二砷诱导前列腺癌细胞凋亡的机制。方法：通过CCK8方法检测三氧化二砷对前列腺癌PC．3细胞增殖的影响；通过流式细胞术检测三氧化二砷对前列腺癌PC．3细胞凋亡的作用；采用亚硫酸氢盐测序法(BisulfitesequencingPCR，BSP)检测三氧化