三氧化二砷对前列腺癌du-145细胞rassf1a基因的去甲基化作用

《三氧化二砷对前列腺癌du-145细胞rassf1a基因的去甲基化作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、郑州大学硕士学位论文三氧化二砷对前列腺癌DU--145细胞RASSF1A基因的去甲基化作用姓名：倪渐凤申请学位级别：硕士专业：肿瘤学指导教师：王留兴201204摘要三氧化二砷对前列腺癌DU．145细胞RASSFlA基因的去甲基化作用研究生：倪渐风导师：王留兴教授郑州大学第一附属医院肿瘤科河南郑州450052摘要背景：前列腺癌(ProstateCancerPCa)是男性泌尿生殖系统最常见的恶性肿瘤之一，在欧美国家，其发病率在男性所有恶性肿瘤中排名第一，死亡率位居第二。我国前列腺癌发病率近年来也迅速增

2、长，且发现时大多已处于中晚期，因此对于晚期前列腺癌的治疗是临床医师面临的巨大挑战。RASSFlA(Rasassciationdomainfamily1八)属于Ras相关结构域家族，是新近发现的一个位于人染色体3p21．3上的抑癌基因111，编码一组RAS效应蛋白，RASSFlA的功能分析显示该蛋白在凋亡的信号传导、微管稳定性和细胞周期循环方面均有潜在的作用121，在诱导细胞凋亡及多种恶性肿瘤的发生的过程中都发挥作用。大量研究表明其在正常组织中可以表达，而在多种实体肿瘤中却出现较高频率的表达缺失，其

3、表达缺失的机制可能有：RASSFlA基因启动子甲基化、纯合子缺失和杂合子缺失，其中以启动子甲基化为主111。所以通过对其去甲基化作用可以使该基因重新表达。目前所应用的甲基化抑制剂中比较常见的是5．氮杂脱氧胞苷(5．Aza．CdR)等胞苷类似物，但是因其细胞毒性和致突变效应均较强的，故限制了它的临床应用【31。最近几年的大量实验研究表明三氧化二砷(As203)用于治疗复发和难治性的急性粒细胞自血病，缓解率高达72％以上，As203治疗实体瘤的疗效也处于临床研究中【引。这些主要是关于对As203的诱导

4、细胞凋亡和细胞分化的作用的研究，而对于其去甲基化作用的研究却相对较少。’摘要本实验通过研究不同浓度的舡203对激素非依赖性前列腺癌DUl45细胞株进行药物诱导后，是否可以使其抑癌基因中的RASSFlA基因启动子区CpG岛去甲基化而诱导其重新表达，达到抑制细胞增殖的作用。从而为激素非依赖性前列腺癌的治疗提供新的治疗药物。目的：研究三氧化二砷(As203)对激素非依赖性前列腺癌DUl45细胞株的增殖抑制作用及对RASSFlA基因去甲基化和蛋白表达的影响，初步探索AS203对l认SSFlA基因可能的作用

5、机制。材料与方法t1、选用激素非依赖性前列腺癌DUl45细胞珠常规培养，生长至对数期时，稀释DUl45细胞的浓度为4x104个／mL，再用含浓度为0、O．5、1．0、2．0、4．0、6．0、12．0、20．0gmol／LAs203的1640培养基分别连续培养24、48和72h。2、应用MTr法检测不同浓度组(0．5，1．0，2．0，4．0，6．0，12．0，20．0／比mol／L)的舡203不同作用时间(24，48，72h)对激素非依赖性前列腺癌DUl45细胞株增殖抑制作用，并绘制生长抑制曲线。3

6、、应用甲基化特异性PCR(MSP)检测经不同浓度组(0、0．5、1．0、2．0、4．0／tmol／L)舡203作用激素非依赖性前列腺癌DUl45细胞株72h后，RASSFlA基因的甲基化情况。4、应用Westernblot检测经不同浓度组(0、0．5、1．0、2．0、4．0／tmol／L)As203的作用激素非依赖性前列腺癌DUl45细胞株72h后，RASSFlA基因蛋白的重新表达情况。5、应用SPSSl7．0统计软件处理实验数据，统计学差异的比较采用t检验、非参数检验及方差分析，检验水准a=0．

7、05。结果：l、舡203可以抑制激素非依赖性前列腺癌DUl45细胞的增殖，在一定范围内随着药物浓度的增高，对前列腺癌增殖的抑制作用越明显，具有剂量依赖性(F=838．089，P<0．05)。同一浓度作用时间越长，抑制率越高(斥8．849,P<0．05)，在浓度达到20．O／,mollL时As203的抑制作用最明显，具有时间依赖性。2、MSP显示在未应用As203处理组，激素非依赖性前列腺癌DUl45细胞的RASSFlA基因呈甲基化状态，而经AS203作用72h后，MSP显示RASSFlAⅡ摘要基因

8、甲基化状态逆转。3、Westernblot显示未应用As203处理组，激素非依赖性前列腺癌DUl45细胞的RASSFlA基因蛋白表达缺失，而经As203作用72h后，RASSFlA基因蛋白表达恢复。应用平均灰度值进行比较，各用药组与未用药对照组RASSFlA基因表达比较均具有显著性差异(Z--10．385,P<0．001)，用药组间两两比较，亦存在显著性差异(P<0．05)。结论：1、As203对激素非依赖性前列腺癌DUl45细胞株具有抑制增殖的作用，且其抑制作用随剂量的增大或时间