丙烯腈、姜黄素对脐带间质干细胞的生物特性的影响

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1、分类号B23Q：32UDC616密级公珏编号10299兰!Q!垒Q!Q江荨大擎硕士学位论文丙烯腈、姜黄素对脐带间质干细胞的生物特性的影响EFFECTSOFACRYLONITRILEANDCURCUMINONTHEBIOLOGYCHARACTERISTICSOFHUMANUMBILICALCORDSTEMCELLS作者姓名：谢岩指导教师：孙晓春副教授小组成员：胡嘉波副教授申请学位：硕士学科专业：临床检验诊断学论文提交日期：2013年4月论文答辩日期：2013年6月7日学位授予单位：江苏大学答辩委员会主席：钱军主任医师评阅人：学位论文版权使用授权书＼测则本学位论文作者完全了解学校有关保留

2、、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权江苏大学可以将本学位论文的全部内容或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密口，在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密口。学位论文作者签名：渌老指导教师签名山I．；年6月I7日蛔弓年G月f7日独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已注明引用的内容以外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中

3、以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：{貅亮日期：～’年‘月I7日江苏大学硕士学位论文摘要目的：探讨丙烯腈(acrylonitrile，ACN)对人脐带间质于细胞(Humanumbilicalcordmesenehymalstemcells，hUC．MSCs)生物学特性的影响，为丙烯腈对人体损害机制的研究提供新的视角；研究姜黄素(Curcumin，CUR)对hUC．MSCs生物学特性的影响，探讨姜黄素对hUC．MSCs可能的影响。方法：(1)采用组织块贴壁法分离培养hUC．MSCs，通过形态学特征、表面标记、成骨诱导等鉴定其生物学特性。(2)用M

4、1vr法检测ACN对hUC．MSCs增殖的影响，通过浓度梯度筛选选取O．1I．tg／mL作为后续试验的作用浓度；成骨诱导分为实验组和对照组，诱导14天后，进行ALP细胞化学染色比较诱导前后的形态学差异，提取细胞总RNA，逆转录成eDNA，通过RT．PCR检测ALP表达水平的差异；分别选择不同浓度ACN作用不同时间后，RT．PCR检测hUC．MSCs细胞因子的表达情况：选择一种抗氧化剂N．乙酰半胱胺酸(NAC)拮抗ACN对hUC．MSCs的损伤，通过MTT法筛选后确定3mMNAC为保护剂量作为后续试验浓度。用3mMNAC预处理hUC．MSCs30min后，分别加入不同浓度的ACN，MT

5、T检测NAC拮抗ACN对hUC．MSCs的氧化作用：流式细胞仪分析ACN对hUC．MSCs凋亡以及细胞周期的影响。(3)MTT法检测CUR对hUC-MSCs增殖的影响；成骨诱导分为实验组和对照组，14天后，进行ALP细胞化学染色，并提取细胞总RNA，逆转录成eDNA，通过RT．PCR检测ALP表达水平的差异；流式细胞仪分析CUR对hUC．MSCs细胞周期的影响。结果：(1)ACN抑制hUC．MSCs增殖，并且随着浓度增高作用时间延长OD值逐渐减小；成骨诱导14天后，ACN组的ALP阳性率和ALP基因表达明显低于对照组；不同浓度ACN作用不同时间后，处理组的hUC．MSCs因子的表达明

6、显低于对照组。MTT结果表明与对照组相比，NAC预处理组细胞OD值更高；细胞周期和凋亡检测的结果表明ACN组细胞凋亡增加。(3)CUR作用后表明随着CUR浓度的增高，hUC．MSCsOD值减小；成骨诱导后，CUR组细胞ALP阳性率和ALP表达水平均增高：细胞周期检测发现CUR组细胞S期细胞增多。结论：(1)ACN可以抑制hUC．MSCs的增殖分化，导致细胞发生凋亡，分泌的细胞因子表达减低，造血支持作用受到抑制。(2)CUR抑制hUC．MSCs的增殖，促进成骨分化。丙烯腈、姜黄素对脐带间质干细胞的生物特性的影响关键词：脐带间质干细胞，丙烯腈，姜黄素江苏大学硕士学位论文ABSTRACTo

7、bjectiveToinvestigatetheeffectsofHumanumbilicalcordmesenchymalstemcells(hUC-MSCs)onthebiologicalcharacteristicsaffectedbyacrylonitrile(ACN)．ThisstudyWaSinordertoprovidedanewwaytostudyACNtoxicitytohumanhealthy．Toinvestigatetheeffec