MSCs联合EPCs在组织工程血管化中的作用研究.pdf

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1、分类号：密级：公开学号：2015210997单位代码：10759石河子大学硕士学位论文MSCs联合EPCs在组织工程血管化中的作用研究学位申请人李智伟指导教师吴向未申请学位类别临床医学硕士专业名称外科学研究领域普外科疾病所在学院医学院中国·新疆·石河子2018年5月TheroleofmesenchymalstemcellscombinedwithendothelialprogenitorcellsinvascularizationoftissueengineeringADissertationSubmittedtoShiheziUniversityInPartialFu

2、lfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineByLiZhiwei(SurgicalDisease)DissertationSupervisor:WuXiangweiMay,2018石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意。研究生签名：时间：年月日使用授权声明本

3、人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文在学校图书馆保存并允许被查阅。有权自行或许可他人将学位论文编入有关数据库提供检索服务。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日中文摘要目的探讨间充质干细胞（MSCs）联合内皮祖细胞（EPCs）体外促进组织工程血管化。方法1.分离、培养来源于4-6周龄小鼠骨髓MSCs和EPCs；2.显微镜下MSCs和EPCs细胞形态学的观察；3.流式细胞仪（Flowcytomet

4、ry）检测MSCs和EPCs表面标记物；4.无纺布聚乙醇酸支架（PGA）的处理；5.细胞接种：实验分为MSC组、EPCs组、MSCs+EPCs组，单一培养组取第3代MSCs和EPCs，分别按3×106个接种于无纺布聚乙醇酸支架（PGA）上后体外培养8周（MSCs+EPCs组按1.5×106个以1:1的比例共同接种）;6.细胞-支架复合物常规切片行HE染色，显微镜下观察组织形态。通过免疫组化染色评价CD31在各实验组中的表达情况；7.数据处理及统计学分析（SPSS17.0）。结果1.利用全骨髓贴壁法结合差时贴壁法可有效分离和扩增MSCs和EPCs。流式细胞仪分别检测细胞表

5、面标记物，第3代MSCs高表达Sca-1、CD29和CD44，符合MSCs特性，第3代EPCs高表达CD309、CD34和CD133，符合EPCs特性。2.组织形态学观察可见MSCs+EPCs组的细胞数目及组织形态较MSCs组、EPCs组多且规则，PGA代谢产物已基本完全降解。3.免疫组化染色结果显示，CD31在MSCs联合EPCs组中的表达均高于EPCs组，且EPCs组高于MSCs组，差异有统计学意义（P<0.0001）。结论MSCs联合EPCs体外可促进组织工程血管化，且其增殖分化和促血管生成能力高于单一培养组。关键词间充质干细胞；内皮祖细胞；无纺布聚乙醇酸支架（P

6、GA）；组织工程血管化IAbstractObjectiveStudyofmesenchymalstemcells(MSCs)combinedwithendothelialprogenitorcells(EPCs)topromotetissueengineeringvascularizationinvitro.Methods1.IsolationandcultureoffourtosixweeksmurinebonemarrowMSCsandEPCs;2.MorphologicalcharacteristicsofMSCsandEPCswereobservedbymicr

7、oscopy;3.MSCsandEPCssurfacemarkersweredetectedbyflowcytometry;4.Handlethenon-wovenpolyglycolicacid(PGA);5.Inoculationcells:TheexperimentwasdividedintoMSCgroup,EPCsgroup,MSCs+EPCsgroup,TakethethirdgenerationofMSCsandEPCs,respectively,by3×106cellsinoculatedonanon-wovenpolyg