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《猪繁殖与呼吸综合征病毒jx0708株的分离鉴定及其nsp2基因的遗传变异分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、58生物技术中国畜牧兽医2010年第37卷第10期猪繁殖与呼吸综合征病毒JX0708株的分离鉴定及其Nsp2基因的遗传变异分析1111111,2,31贾怀杰,陈国华,房永祥,王晓霞,李小庆,莫斯科,瞿惠玲,景志忠(1.中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点实验室,兰州730046;2.甘肃农业大学动物医学院,兰州730070;3.甘肃省兽医局,兰州730030)摘要:采集江西省某猪场疑似猪繁殖与呼吸综合征病料,RTPCR检测可扩增出PRRSVORF7特异性片段,序列分析发现其与美洲型毒株序列一致性达93.9%以上,与欧洲型毒株仅
2、为69.8%。将采集的脑和肺脏处理后接种Marc145细胞盲传,在盲传的细胞中可扩增到PRRSVORF7特异性片段,传至第6代时出现明显的细胞病变;将该毒株NSP2非结构蛋白基因测序分析,发现其编码的氨基酸与国内近年来分离的高致病性PRRSV毒株有较高的同源性,与美洲型代表株VR2332相比缺失第482位和533561位共30个氨基酸;纯化病毒并进行电镜观察,可见典型的PRRSV病毒粒子。第8代的细胞毒回归30日龄仔猪,可观察到猪繁殖与呼吸综合征典型症状和病理变化。这表明已成功地分离到1株美洲型PRRSV变异株,命名为JX0708株。关键词:猪繁殖与呼吸综合征病毒;JX0708株
3、;分离鉴定;Nsp2基因;遗传变异分析中图分类号:Q78文献标识码:A文章编号:16717236(2010)10005805猪繁殖与呼吸综合征(porcinereproductiveand株引起的以高热、呼吸困难为主要症状,高发病率和respiratorysyndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综高死亡率为显著特征的急性传染病,随后波及全国合征病毒(porcinereproductiveandrespiratory大部分区域,导致生猪大批死亡,造成巨大的经济损syndromevirus,PRRSV)引起的接触性传染病,主失(李真光等,2009)。要引起
4、母猪怀孕后期流产、早产、死胎、弱胎和木乃PRRSV属于套式病毒目、动脉炎病毒科、动脉伊胎等的繁殖障碍,哺乳仔猪出现呼吸道症状和断炎病毒属,为单股正链RNA病毒(Cavanagh,奶前死亡率增高(殷震等,1997)。PRRS于1987年1997)。PRRSV不同分离株核苷酸序列存在广泛首先暴发于美国(Conzelmann等,1993)。1990年,而明显的变异,依据血清学试验及结构基因序列分荷兰科学家Wensvoort博士首次从感染猪体内分析,可将PRRSV划分为2种基因型或亚群:以LV离到该病毒,并命名为Lelystad病毒(LV)(Terp株为代表的欧洲型(A亚群)和以VR233
5、2为代表stra等,1991);1992年美国研究人员用CL2621细的美洲型(B亚群),欧洲型主要流行于欧洲地区,而胞也分离到PRRSV,并命名为VR2332毒株(Col美洲型则主要流行于美洲和亚洲,但丹麦等一些欧lins等,1992)。目前亚洲的日本、韩国、菲律宾等国洲国家出现了两型PRRSV的感染。目前,中国所也有该病报道。1995年国内某些猪场发生疑似报道的分离株均为美洲型PRRSV,尚未见欧洲型PRRS病例,1996年国内该病料中分离到PRRSV,毒株。本研究对2007年8月采自江西省某猪场疑从而证实了本病在中国的存在(郭宝清等,1996)。似猪繁殖与呼吸综合征的病料进行
6、PRRSV病原检目前已出现多种变异株(魏宏等,2007;张彩勤等,测、病毒分离、鉴定和Nsp2非结构蛋白基因进行遗2008;高志强等,2004)。2006年以来,在中国江西、传变异分析。江苏、湖南、安徽等南方省份暴发了由PRRSV变异1材料与方法1.1材料收稿日期:201003051.1.1病料来源组织病料采自江西某猪场疑似作者简介:贾怀杰(1980-),男,甘肃人,硕士,研究实习员,主要从猪繁殖与呼吸综合征病死猪的脾脏、肺脏、淋巴结、事人兽共患病及病原与宿主分子生物学和免疫学研究。血液等。通信作者:景志忠(1964-),男,研究员,硕士生导师,主要从事1.1.2试验动物
7、试验猪为家畜疫病病原生物学人兽共患病及病原与宿主分子生物学和免疫学研究。国家重点实验室封闭饲养、繁殖的合作猪。Email:zhizhongj@yahoo.com.cn基金项目:国家自然基金项目(30871884);国家支撑计划1.1.3细胞株、菌株、载体和培养基Marc145细(2006BAD31B03);甘肃省支撑计划(0804NKCA076)。胞购自中国兽医药品监察所,DH5菌种系家畜疫中国畜牧兽医2010年第37卷第10期生
