鞘内注射il-18中和抗体对大鼠吗啡耐受形成的影响

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1、南方医科大学2010级硕士学位论文鞘内注射IL-18中和抗体对大鼠吗啡耐受形成的影响Theeffectofintrathecalinjectionofanti-ratInterleukins·-18antibodyonthedevelopmentofmorphinetoleranceinrats课题来源：国家自然科学基金资助项目(No30901399)学位申请人导师姓名专业名称培养类型培养层次所在学院舒银莓艮孥伟彦麻醉学专业学位硕士南京军区南京总医院2013年3月20日广州硕士学位论文鞘内注射白介素一18中和抗体对大鼠吗啡耐受形成的影响硕士研究生：舒银银指导教师：

2、李伟彦摘要背景：吗啡是临床广泛应用的强效镇痛药，也是治疗譬如慢性癌痛等多种慢性疼痛的最后选择。但长期应用吗啡后其镇痛作用逐渐减弱，即产生所谓的吗啡耐受效应。吗啡的成瘾性和耐受性迫使患者为获得满意的镇痛效果而加大药量，进而更增加了吗啡的副作用。因此探讨吗啡耐受的机制，有效地防治吗啡耐受是基础和临床研究共同关注的一个热点话题。吗啡耐受的机制十分复杂，近年来研究人员对此做了大量研究。多项研究提示胶质细胞活化，尤其是脊髓小胶质细胞及星形胶质细胞的活化，与吗啡耐受的发生密切相关。与神经病理性疼痛研究结果相似，大量研究提示：抑制小胶质细胞活化仅能预防吗啡耐受的发生，却不能缓解

3、已存在的吗啡耐受。而非特异性胶质细胞抑制剂丙戊茶碱则既能预防吗啡耐受的发生，也能缓解已存在的吗啡耐受。据此推测吗啡耐受可能是由脊髓小胶质细胞的活化引起的，而星形胶质细胞的持续活化则对吗啡耐受起到了维持作用。2008年Miyoshi等研究发现脊髓中IL—18介导的小胶质细胞与脊髓星形胶质细胞的相互作用能够增强神经损伤后的神经病理性疼痛。IL．18主要在小胶质细I摘要胞中表达，而IL一18R则主要在星形胶质细胞中表达。IL．18介导脊髓中小胶质细胞与星形胶质细胞的相互作用的机制是：神经病理性损伤发生后，TLR4被激活并通过MAPKp38信号通路引发小胶质细胞的激活，通

4、过TLR4／MAPKp38通路激活的小胶质细胞释放IL．18到胞外，并通过旁分泌的方式作用于星形胶质细胞上的IL一18＆IL一18与IL．18R的特异性结合增强了星形胶质细胞中NF．r,B的磷酸化，导致了GFAP的上调，并且IL一18R的激活对星形胶质细胞中IL．18R的表达起到了正调节作用。生成的IL一18或其他细胞因子又可以通过自分泌或旁分泌的方式刺激小胶质细胞和星形胶质细胞，进而引起更多的促炎性细胞因子(如IL—lD，IL一6，TNF—a)、环氧化酶2(COX-2)以及一氧化氮合酶(NOS)的生成，胶质细胞生成的这些促炎因子还可以作用于脊髓背角神经元，进而引

5、起另一系列反应。Miyoshi等的实验表明L5脊神经结扎后脊髓小胶质细胞表达IL—18明显增加，TLR4／MAPKp38通路促进了IL．18的释放：而L5脊神经结扎后脊髓星形胶质细胞表达IL—18受体亦明显增加，阻断IL一18或IL—18受体信号，能明显减轻神经损伤诱导的触觉过敏，并抑制星形胶质细胞标志物GFAP的表达，及NF．r．B的磷酸化。实验表明神经损伤能够分别诱发脊髓背角中小胶质细胞和星形胶质细胞中IL．18和IL．18R的增加，而IL．18介导的小胶质细胞与星形胶质细胞的相互作用对于通过神经胶质细胞的特定信号转导级联引起的痛觉过敏的发展与维持起着决定性作

6、用。IL．18是IL．1家族成员，与IL—lp有很多相似之处，而IL一1p在吗啡耐受中的作用早已明了，Shavit等研究发现慢性吗啡耐受能够引起IL．1B释放增多。由于导致吗啡耐受和神经病理性疼痛的分子机制有着众多的相似性，实验证实脊髓中IL．18介导的小胶质细胞与脊髓星形胶质细胞的相互作用能够增强神经损伤后的神经病理性疼痛，我们推测它可能也参与了吗啡耐受的形成。即小胶质细胞活化并释放的IL—18，作用于星形胶质细胞表面的IL．18受体，导致了星形Ⅱ硕士学位论文胶质细胞的活化，吗啡耐受的维持。阻断脊髓内IL．18信号，可能为吗啡耐受的防治提供一条新的途径。基于这个

7、假设，本实验通过鞘内给予特异性的IL一18中和抗体，阻断脊髓IL．18信号传导，探讨其对大鼠皮下注射吗啡诱导的吗啡耐受形成的影响，并分析其可能的作用机制，为防治吗啡耐受提供一条新的思路和科学的理论依据。目的：观察选择性阻断脊髓IL一18信号对皮下注射吗啡诱导的慢性吗啡耐受的影响，明确IL．18信号在慢性吗啡耐受中的作用，为防治吗啡耐受提供新的思路和科学的理论依据。方法：雄性SD大鼠50只，用改良的的Yaksh法进行鞘内置管，建立鞘内置管模型。具体操作为大鼠腹腔注射2％戊巴比妥钠60mg·kg。1麻醉后，大鼠取俯卧位，置于动物手术台上，将大鼠腰部垫高，摸清两侧髂嵴，

8、其连线与棘