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《人可溶性血管内皮细胞生长因子受体flt-1基因在链霉菌中的克隆表达》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、!"卷!期微生物学报%&’(!".&(!"##"年$月!"#$%&"’()&(*(+&"$,&-&"$)*+*,-"##"!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!人可溶性血管内皮细胞生长因子受体!"#$%基因在链霉菌中的克隆表达"姜自彬李元""（中国医学科学院中国协和医科大学医药生物技术研究所北京1###2#）摘要：应用938:;9技术，从人脐静脉内皮细胞中扩增出编码人可溶性血管内皮细胞生长因子（%<=>）受体>’-81胞外区前四个结构域的
2、基因片段，亚克隆至?@;’$质粒进行测序，将目的基因片段连接至链霉菌表达载体?A=B+??，获得重组质粒?A=B+??8>，将其转化至!"#$%"&’()*$+,-.-/01+3C"!，获得基因工程菌株!#$%"&’(*$+,-.-/01+（?A=B+??8>），对其培养上清液进行ADA8:)=<及E4,-4FGH’&-分析，结果显示，在5/I5JD处有特异性条带出现，表明,>B381在链霉菌中获得了成功表达，受体配基结合实验显示表达产物与%<=>可特异性结合，表明其具有配基结合生物活性。关键词：可溶性
3、%<=>受体，>’-81，链霉菌，基因表达中图分类号：K0$5文献标识码：)文章编号：###185"#6（"##"）#!8#!118#0血管内皮细胞生长因子受体（%L,M*’LF4GN&-O4’P*Q+F&R-OSLM-&FF4M4?-&F，%<=>9）属于酪氨酸蛋白激酶受体家族第三亚型，主要在内皮细胞上表达，可介导血管内皮细胞生长因子（%<=>）的生物效应，促使血管内皮细胞分裂增殖，形成新的血管。血管生成在胚胎发育及伤口愈合等生理过程中起重要的作用，成人后，血管生成基本停止。但在某些病理条件/下，血管
4、生成又变得异常活跃和重要，例如，肿瘤生长达到"QQ时，要继续生长，就必须有血管生成，因此，抑制血管生成对控制肿瘤等与血管生成有关的疾病具有重要意义，通过抑制%<=>9和%<=>的结合作用可阻断血管生成，达到控制疾病的目的。%<=>9主要分为两种类型：受体1即SQ,样酪氨酸激酶（SQ,8’PJ4-TF&,PG4JPGL,4，>’-81）、受体"即激酶插入结构域受体（JPGL,4PG,4F-N&QLPG8M&G-LPGPG+F4M4?-&F，CD9）。>’-81基因全长05#$H?，编码区域为!#1!H?，
5、编码1//$个氨基酸，蛋白分子量约1$#JD，分为胞外区、跨膜区和胞内区三部分，其中胞外区由.端信号肽和0个免疫球蛋白样环状结构（U+8’PJ4’&&?）组成，跨膜区由""个碱性氨基酸组成，胞内区由激酶功能区、酪氨酸激酶插入区及;［1］末端组成。>’-81调节内皮细胞之间和内皮细胞与细胞间质之间的作用，可促进细胞的［"］迁移和血管成形。由于>’-81在血管生成中的重要作用，使其在医药应用方面具有极大的开发价值。链霉菌为丝状革兰氏阳性菌，属原核表达系统，它具有多种信号肽，可直接介导蛋白质分泌至胞外。本文报
6、道从人脐静脉内皮细胞中克隆得到编码>’-81胞外区的前四个结"国家自然科学基金资助项目（/##0##"/）""联系人：李元，北京天坛西里1号，邮编：1###2#，34’：（#1#）5/12//"#作者简介：姜自彬（16567），男，山东临沭县人，博士，主要从事基因工程药物的研究。收稿日期："##181#8"6，修回日期："##18118"$+&*微生物学报+*卷构域（!"#$%&）的基因，在变铅青链霉菌!’"#$#%&’(()*+中获得分泌表达。并分别采用两种链霉菌分泌信号肽,--和.!/，以研究不同信
7、号肽对"#$%&在!’"#$#%&’(中的分泌表达的影响。!材料和方法!"!材料!#!#!菌株和质粒：菌株)’*+"#(0%&；!’"#$#%&’(()*+。质粒-12&3，用于测序；-405,--，链霉菌—大肠杆菌穿梭质粒，含-12&3及!’,"+-#(./+01(分泌信号肽,--的最小复制区，为本室自行构建；-165*&7链霉菌—大肠杆菌穿梭质粒；-842，含!’$2’2312"&2分泌信号肽.!/全序列及其调控序列。以上菌株及质粒均为本室保存。!#!#$培养基：58培养基用于大肠杆菌的培养和保存；
8、!培养基和4培养基用于链霉菌原生质体的制备；9培养基用于链霉菌的培养及转化子的筛选；:;<;培养基和2<培养*基用于重组菌株的培养。58培养基按文献［=］配制，其它均按文献［+］配制。!#!#%工具酶和试剂：总9>?提取试剂盒、9(%@29试剂盒、A>?回收试剂盒分别购自8/BAC.—(CDE公司、@FBGC,H公司、IJ?0;>公司；限制性内切酶、(HKA>?聚合酶、(+A>?连接酶分别购自@FBGC,H公司和4HL,BL公司；小鼠抗人"
