资源描述：
《重组腺病毒载体负载树突状细胞诱导乙肝病毒特异性细胞毒性t淋巴细胞》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、中华细胞与干细胞杂志(电子版) 2012年11月第2卷第4期ChinJCellStemCell(ElectronicEdition),Nov2012,Vol.2,No.4261•实验研究•重组腺病毒载体负载树突状细胞诱导乙肝病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞陶然李进张克马世武姜维李溢柔周向军【摘要】目的本研究利用重组腺病毒载体将乙肝病毒基因导入树突状细胞（DC）内表达成内源性蛋白，探索DC体外抗原负载并诱导乙肝病毒（HBV）特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的有效方法。方法分离外周血单个核细胞（PBMC）并诱导成DC。用HF
2、P3肽辅助腺病毒载体进行抗原负载，检测DC细胞内乙肝核心抗原基因的表达，比较成熟前后DC的表面分子，研究DC诱导的乙肝病毒核心抗原（HBcAg）特异性CTL的增殖。应用统计软件SPSS17.0进行统计分析，以P <0.05为差异有统计学意义。结果重组腺病毒CHB3感染的DC能有效表达HBcAg蛋白。HFP3辅助感染能显著提高感染效率达3~10倍。腺病毒载体负载的DC表面CD80、CD86、CCR7的表达有所上调，但差异无统计学意义（平均荧光强度CHB3/iDC：CD80，46.2±14.6 / 29.9±7.9，P =
3、0.209；CD86，142.0±12.9 / 113.3±6.5，P =0.430；CCR7，49.3±3.0 / 36.4±4.6，P =0.054）。Cocktail促成熟后，CD80、CD83、CD86、CCR7显著上调（平均荧光强度Cocktail-CHB3/iDC：CD80，97.1±8.1/29.9±7.9，P =0.0019；CD83，75.4±8.4/26.8±1.5，P =0.017；CD86，176.2±14.8/113.3±6.5,P=0.021；CCR7，75.3±3.4/36.4±4.6，P
4、 =0.0016），HLA-DR分子维持高表达。CHB3负载的DC与自体T细胞共培养，可检测到HBcAg特异性CTL比例明显增高（1例由0.25﹪增至1.98﹪，另1例由0.19﹪增至1.37﹪）。结论在优化的条件下，重组腺病毒载体CHB3能够有效地介导抗原蛋白HBcAg在DC内高水平表达，加入HFP3辅助感染能在较低的感染剂量下获得较高的感染效率，有利于维持DC的活性。重组腺病毒载体CHB3结合HFP3的抗原负载方案能有效地诱导HBcAg特异性CTL。【关键词】树突细胞；腺病毒；肝炎核心抗原,乙型；T淋巴细胞,细胞毒
5、性EfficientinductionofhepatitisBvirusspecificCTLthroughadenovirusinfectedhuman*dendriticcellsTAORan,LIJin,ZHANGKe,MAShi-wu,JIANGWei,LIYi-rou,ZHOUXiang-*jun.TsinghuaYuanxingBio-PharmScience&TechnologyCo.Ltd,Shenzhen518057,ChinaCorrespondingauthor:ZHOUXiang-jun,Ema
6、il:joe@beike.cc【Abstract】ObjectiveThisstudyinvestigatedtransductionandexpressionofHBVgeneindendriticcellsbyrecombinantadenovirusvectorstoestablishareliablemethodologyfortheDC-antigenloadinvitroandinductionofHBV-specificCTL.MethodsToaddressthisissue,weoptimizedco
7、nditionsforadenovirusinfectionusingrecombinantadenoviralvectorrAd-GFPorCHB3(rAdexpressedHBcAg)andasmallpeptide(HFP3).WealsoassessedtheefficiencyofinfectionofDCsaswellastheeffectoncellsurfacemarkerexpressionandDCfunctions.Thedatainthestudywasanalysedbystatistical
8、softwareSPSS17.0.ThestatisticalsignificancewasdeterminedbyStudent’st-test;P<0.05wasconsideredstatisticallysignificant.ResultsOurresultsdemonstratedthatHFP3significant
