5负载u266细胞抗原的树突状细胞诱导t细胞的抗骨髓瘤活性

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1、5负载U266细胞抗原的树突状细胞诱导T细胞的抗骨髓瘤活性【摘要】　　本研究探讨负载骨髓瘤U266细胞裂解物的树突状细胞（DC）瘤苗活化的T细胞对U266细胞的体外杀伤作用。用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞，然后分别用含重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GMCSF)、重组人白细胞介素4（IL4）的AIMV无血清培养液和含胎牛血清的RPMI1640培养液体外诱导培养DC，用MTT法检测负载U266细胞全抗原的DC活化的T细胞对U266细胞的杀伤作用。结果表明：健康人外周血来源的单个核细胞用无血

2、清培养液和含血清培养液诱导培养均可得到足够数量的DC，这两种培养液培养的DC在表型上无明显差异。分别用负载U266细胞全抗原的DC＋IL2、成熟DC＋IL2和单独应用IL2刺激后的T细胞与U266细胞共培养，其对U266细胞的杀伤作用逐渐减弱，负载U266细胞全抗原的DC＋IL2刺激后的T细胞较成熟DC＋IL2刺激后的T细胞对U266细胞的杀伤作用明显，且T细胞对U266细胞的杀伤率随效靶比的增加而升高。结论：用GMCSF、IL4诱导培养健康人外周血单个核细胞可以得到不成熟的DC，体外负载U

3、266细胞全抗原的DC可以刺激自体T细胞增殖并能杀伤U266细胞。【关键词】多发性骨髓瘤；树突状细胞；免疫治疗　　AntimylomaActivityofTcellActivatedbyDentriticCellsLoadingAntigenofU266CellsAbstractThisstudyedtoinvestigatetheeffectofTcellsactivatedbyDCsloadedononuclearcellshealthydonor,andadherentedonculturepla

4、te.AdherentcellsfreemediumorinRPMI1640mediumcontained20%fetalbovineserum(FBS),supplementedacrophagecolonystimulatingfactor(GMCSF)andinterleukin4(IL4).Methylthiazolyltetrazolium(MTT)assayperipheralbloodmononuclearcellsculturedbyAIMVserumfreemediumorR

5、PMI1640mediumcontainingFBShadsimilarimmunophenotype.TcellsactivatedbyDCsloadedatureDCsmightkillU266cellsinadosedependentmanner.Itisconcluded,DCsderivedfromperipheralbloodmononuclearcellsofhealthydonorandloadedyelomaresponseofTcellsinvitro.Keyultiplemyelo

6、ma;dendriticcell;immunotherapyJExpHematol2007;15(3):581-585树突状细胞（DC）是体内功能最强的抗原呈递细胞(APC)，存在于除脑组织外的所有组织器官中，是机体免疫反应的始动者，其表达丰富而独特的免疫球蛋白分子而发挥免疫佐剂的作用。DC表面的免疫球蛋白不仅可以聚集免疫细胞，而且有利于免疫细胞间的信息传递；DC受抗原性物质刺激后能够分泌多种细胞因子，诱导特异性的免疫反应。肿瘤免疫逃避的机制之一是抗原呈递细胞的数量不足或功能下降，而肿瘤细胞的清除要依靠宿

7、主抗原呈递细胞的强有力的功能。DC作为最强的唯一能激活初始T细胞的抗原呈递细胞，在治疗肿瘤和预防肿瘤发生、复发及转移中发挥重要作用。目前针对多发性骨髓瘤的治疗主要采用化疗和造血干细胞移植等综合治疗，取得了一定的效果，但微小残留病灶的存在使骨髓瘤易复发，患者生存期缩短。以DC为基础的免疫治疗是近几年来清除骨髓瘤微小残留病研究的热点。国外报道用无血清培养液诱导培养骨髓或外周血单个核细胞来源的DC，然后用凋亡的骨髓瘤细胞或骨髓瘤细胞分泌的单克隆免疫球蛋白(Ig)，即M蛋白负载DC，使其捕获、加工并表达肿瘤抗原而

8、得到DC瘤苗，再通过静脉或皮下注射的方式回输体内，可以观察到骨髓瘤特异的抗瘤效应［1，2］。国内这方面的研究较少。本实验体外诱导培养健康人外周血来源的DC，使其负载骨髓瘤细胞系U266细胞全抗原，探讨负载抗原的DC对淋巴细胞的活化作用，及活化的淋巴细胞对U266细胞的杀伤活性。主要试剂U266细胞系来自本试验室，AIMV无血清培养液、RPMI1640细胞培养液、胎牛血清（FBS）均购自Gibco公司；淋巴细胞分离液（1.07