负载酸洗抗原肽的树突状细胞诱导抗膀胱癌的作用

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1、负载酸洗抗原肽的树突状细胞诱导抗膀胱癌的作用【摘要】目的研究弱酸洗脱法提取抗原肽致敏的树突状细胞(DCs)诱导针对膀胱癌细胞的特异性杀伤效应。方法弱酸洗脱法获得BIU87细胞抗原肽，用GMCSF、IL4和TNFα体外诱导正常人DC并负载肿瘤抗原，进而激活T淋巴细胞；用MTT法检测其对BIU87体外杀伤效应。结果弱酸可以洗脱肿瘤细胞膜表面大部分与MHCⅠ类分子结合的抗原肽；外周血单个核细胞可培养出DC；效靶比40：1时负载膀胱癌抗原肽的DC诱导特异性CTLs可杀伤高达(78.5±7.0)%的BIU87细胞。结论弱酸

2、可以有效洗脱肿瘤细胞表面的Ⅰ类抗原肽,负载该类多肽的DC在体外可诱导出高效而特异的抗膀胱癌效应。【关键词】树突状细胞；膀胱癌；细胞毒性；生物治疗CytotoxicityInducedbyDendriticCellsPulsedorAntigenPeptidesagainstBladderCancerCellLineYANGHuixiang,XUYongDepartmentofUrology,theSecondHospitalofTianjinMedicalUniversity，TianjinInstituteofUrolog

3、icalSurgery,Tianjin300211,ChinaAbstract：ObjectiveToobservespecificcytotoxicityinducedbydendriticcellspulsedorantigenpeptidesagainstbladdercancercellline.MethodsTheantigenpeptidesofBIU87cellsildacidelutedtechnique.DCshealthyhumanperipheralbloodmonouclearcellsinvitro

4、,thenpulsedorpeptides.TumorspecificCTLsulatedbyDCspulsedorpeptidesandcytotoxicitycausedbytheCTLsagainstbladdercancercellseasuredbyMTTtechnique.ResultsMildacidcouldelutetumorantigenpeptidesfromtumorcellseffectively.DCsperipheralbloodmonouclearcells.Thecytotoxicityr

5、ateof(78.5±7.0)%ulatedCTLsateffector:targetratioof40∶1.ConclusionMildacidcouldeluteclassⅠrestrictedpeptidesfromtumorcells.DCsloadedthatpeptidescaninducehighperformanceandremarkablyspecificcytotoxicityinvitro.Keymunotech产品；PE标记的鼠抗人HLAABC（TT)为Sigma公司产品；Bradford蛋白浓度测定

6、试剂盒为TPI公司产品。1.3弱酸洗脱法获取抗原肽取对数生长期的BIU87细胞10ml(浓度2×105个/ml)，离心后弃上清，加入4ml弱酸提取液(0.131mol/L枸橼酸，0.066mol/L磷酸氢二钠，调节pH至3.3)，室温下轻晃5min，离心吸取上清液，置于-20℃冰箱短期保存。流式细胞仪检测弱酸洗前后BIU87细胞表面表达HLAABC（Cs）悬液。调整细胞浓度为2×106/ml，培养2h后获得的贴壁细胞分为实验组和对照组，其中实验组加入rhGMCSF800U/ml、rhIL41000U/ml、rhTNF

7、α100ng/ml。每3天半量更换新鲜培养基和细胞因子，对照组只补充新鲜培养基。将培养第3、6d的DCs分别加入肿瘤抗原肽10mg/L或不加入。第9d收集细胞。流式细胞仪检测细胞表型；自体混合淋巴细胞反应检测DCs对T淋巴细胞的促增殖能力。1.5细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)的培养尼龙毛柱法获取自身新鲜T淋巴细胞。调整细胞浓度为1.2×105/ml，将其分为4组：第1组加入经酸洗脱的膀胱癌细胞抗原肽致敏的DCs，第2组加入未负载抗原的DCs，第3组加入肿瘤抗原10μg，第4组加入对照的单个核细胞，共同孵育4d（效应细胞与刺激

8、细胞比例为20∶1）后进行杀伤活性的测定。1.6细胞毒实验调整丝裂霉素C处理的BIU87细胞和HL60细胞浓度为1×104／ml，分别加入96孔板，各分为5组：A组加入经酸洗脱的膀胱癌细胞抗原肽致敏的DCs激活的CTLs，B组加入未负载抗原DCs激活的CTLs，C组加入膀