茅苍术挥发油对幽门螺旋杆菌抑制作用的实验研究

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1、江苏大学硕士学位论文分类号B32墨UDC52窆密级公珏编号!Q2窆堡!Q!塑曼!茅苍术挥发油对幽门螺杆菌抑制作用的实验研究EXPERIMENTALSTUDYONINHIBITIONEFFECTOFATRACTYLODESLANCEADCVOLATILEOILSONHELICoBACTERPYLoIU指导教师：邵世和教授作者姓名：余敏申请学位：医学硕士学位专业名称：临床检验诊断学论文提交日期：2013年5月论文答辩日期：2013年6月6日学位授予单位和日期：江苏大学(2013年6月)答辩委员会主席：黄新祥教授评阅人：独创性声明本人郑重声明：所呈交的

2、学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已注明引用的内容以外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果，也不包含为获得江苏大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：仓敬2DB年6月6日学位论文版权使用授权书江苏大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子

3、文档的内容和纸质论文的内容相一致，允许论文被查阅和借阅，同时授权中国科学技术信息研究所将本论文编入《中国学位论文全文数据库》并向社会提供查询，授权中国学术期刊(光盘版)电子杂志社将本论文编入《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》并向社会提供查询。论文的公布(包括刊登)授权江苏大学研究生处办理。本学位论文属于不保密团。学位论文作者签名：会叙沙B年b月6日指导教师签名：研地私20l；if-6月to日茅苍术挥发油对幽门螺杆菌抑制作J{j的实验研究摘要目的：本研究通过体外实验探索茅苍术挥发油(AtractylodeslanceaDCvolatileoils

4、)对幽门螺杆菌的生长及其生物膜的形成是否具有抑制作用；探讨亚抑菌浓度挥发油对幽门螺杆菌毒力因子CagA在胃上皮细胞GES．1内的转运及细胞炎症因子IL-8的分泌是否有影响，为进一步探讨茅苍术挥发油的抗菌作用及其作用机制奠定基础。方法；1．通过水蒸气蒸馏法提取制备茅苍术挥发油：2．将幽门螺杆菌NCTCll637接种哥伦比亚血琼脂平板，微需氧环境3TC培养72h，常规肉汤稀释法测其最低抑菌浓度(minimuminhibitoryconcentration，MIC)，SPSSl7．0计算其IC50；3．检测不同浓度茅苍术挥发油(1／8×MIC，1／4×

5、MIC，1／2xMIC，1×MIC)对幽门螺杆菌生长曲线的影响；4．利用12孔板法构建幽门螺杆菌生物膜，检测亚抑菌浓度茅苍术挥发油对其生物膜形成的抑制作用，分别采用结晶紫法和荧光显微镜检测生物膜内细菌数量的变化：5．将细菌与胃上皮细胞GES．1共培养4h、8h及12h后，提取细菌细胞总蛋白及总RNA并逆转录至cDNA；6．Westernblot检测亚抑菌浓度茅苍术挥发油对幽门螺杆菌的毒力因子CagA在胃上皮细胞内转运的影响；7．ELISA法检测亚抑菌浓度茅苍术挥发油对幽门螺杆菌诱导胃上皮细胞分泌IL-8功能的影响；8．Real—TimePCR法检

6、测亚抑菌浓度茅苍术挥发油对幽门螺杆菌CagA¨江苏大学硕士学位论文mRNA变化及皿名mRNA变化的影响。结果：1．常规稀释法试验结果表明：当茅苍术挥发油浓度茎1．875mg／ml时，对幽门螺杆菌的生长具有抑制作用，且抑制作用随挥发油浓度的增大而增强。其对幽门螺杆菌的MIC为7．5mg／ml，SPSSl7．0计算其IC50为2．181mg／ml；2．12孔板法成功制备了幽门螺杆菌生物膜；且结晶紫染色法及荧光显微镜观察提示亚抑菌浓度茅苍术挥发油可抑制幽门螺杆菌生物膜的形成；3．Westernblot结果显示：亚抑菌浓度茅苍术挥发油作用幽门螺杆菌后，使

7、其毒力因子CagA在胃上皮细胞内的转运量明显减少；4．ELISA结果表明：亚抑菌浓度茅苍术挥发油作用幽门螺杆菌后，可降低GES一1细胞的IL-8分泌，提示茅苍术挥发油可减弱幽门螺杆菌的毒力及诱导炎症反应能力：5．Real．TimePCR法证实亚抑菌浓度可降低GES一1细胞儿名mRNA的表达、增加C口gAmRNA的表达。结论：本研究实验结果表明茅苍术挥发油对幽门螺杆菌的生长和生物膜的形成具有抑制作用；亚抑菌浓度茅苍术挥发油可降低幽门螺杆菌毒力因子CagA在胃上皮细胞内的转运及诱导炎症反应的能力。关键词：茅苍术，挥发油，幽门螺杆菌，生物膜，CagA，

8、IL08Ill茅苍术挥发油对幽门螺杆菌抑制作用的实验研究ABSTRACTObjective：Thepurposeofthisstudyi