茅苍术挥发油诱导人类胃腺癌mkn-45细胞胀亡的实验研究

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1、分类号盟5UDC5Z§密级公珏绣；ii号至Q2呈垒S量Q三垒Q玉耋硕士学位论文茅苍术挥发油诱导人类胃癌MKN一45细胞胀亡的实验研究STUDYONESSENTIALOILEXTRACTEDFROMRHIZOMEOFATRACTYLODEL芦州CEAINDUCESONCOSISINHUMANMKN．45CANCERCELLS指导教师：邵世和教授作者姓名：陈浩宁申请学位：硕士专业名称：病原生物学论文提交日期：2013年s月论文答辩日期：2013年6月学位授予单位：江苏大学学位授予日期：2013年6月答辩委员会主席z黄新祥评阅人独创性声明本人郑重声明：所呈交的

2、学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已注明引用的内容以外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果，也不包含为获得江苏大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：豫；％宁叩哆年Z月‘日学位论文版权使用授权书江苏大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的

3、内容和纸质论文的内容相一致，允许论文被查阅和借阅，同时授权中国科学技术信息研究所将本论文编入《中国学位论文全文数据库》并向社会提供查询，授权中国学术期刊(光盘版)电子杂志社将本论文编入《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》并向社会提供查询。论文的公布(包括刊登)授权江苏大学研究生院办理。本学位论文属于不保密J。学位论文作者签名：聪滗宁zo哆年乡月乡同舯教需：印也矛zo哆年；月‘I同’江苏大学硕士学位论文目的：摘要探讨茅苍术挥发油(EssentialoilextractedfromrhizomeofAtractylodelancea．，EOEAL)诱导人类胃

4、癌细胞株MKN．45细胞发生胀亡的可能性及发生机制，为开发抗肿瘤药物提供实验依据和理论基础。方法：1．使用挥发油提取器提取茅苍术挥发油。2．通过MTT法确定EOEAL诱导MKN．45细胞胀亡的作用浓度(IC50值)；倒置显微镜观察EOEAL诱导胃癌MKN．45细胞发生胀亡的形态学变化。3．通过不同盐水浓度研究渗透压环境对EOEAL诱导MKN．45发生胀亡的影响；通过WesternBlot法检测EOEAL诱导MKN．45细胞发生胀亡时细胞骨架蛋白表达的变化：通过间接免疫荧光法检测EOEAL诱导MKN．45细胞发生胀亡时细胞结构的变化；通过EGTA和不同分子

5、量的PEGs检测EOEAL诱导MKN．45细胞发生的胀亡是否受钙离子的影响，并推测细胞膜形成孔径的大小；通过RNA沉默法检测穿孔素蛋白在EOEAL诱导MKN．45细胞胀亡中的作用：通过ELISA法检测EOEAL诱导MKN．45细胞发生胀亡时细胞分泌功能的变化。结果：1．MTT法实验结果显示EOEAL作用于胃癌MKN．45细胞1．5h的IC50浓度为2la1／ml。2．2la1／mlEOEAL作用MKN．45细胞1．2h的过程中，细胞出现肿胀，细胞质崩解。3．渗透压实验结果表明EOEAL诱导的细胞胀亡与高渗、低渗环境引起的细胞形态学改变无关。4．WB和间接

6、免疫荧光实验结果显示：EOEAL诱导的MKN．45细胞胀亡不破坏细胞核结构，不影响细胞骨架。5．EGTA和PEGs实验结果表明：EOEAL诱导MKN．45细胞胀亡的机制可能与钙离子浓度无关，细胞膜上可能诱导出现影响细胞渗透压平衡的孔道。I茅苍术挥发油诱导人类胃癌MKN一45细胞胀亡的实验研究6．穿孔素蛋白沉默实验表明穿孔素蛋白并非Ml刚．45细胞发生胀亡的主要因素。7．ELISA实验结果显示：EOEAL作用于胃癌MKN-45细胞后可以抑制IL-8的分泌，微促进TNF—Q的分泌。结论：1．茅苍术挥发油可以诱导MKN．45细胞发生胀亡，并对细胞结构造成严重破

7、坏。2．茅苍术挥发油诱导的MKN．45细胞胀亡为一个不可逆的进程，只要出现早期胀亡的特征，即便立刻去除茅苍术挥发油等诱导因素也无法阻止胀亡的发生。3．低渗环境引起的细胞肿胀与胀亡可形成放大效应，但是高渗环境引起的细胞皱缩不能阻止胀亡发生。4．茅苍术挥发油诱导的MKN．45细胞胀亡不会对细胞核结构造成损伤，也不会降解胞质内的细胞骨架。5．茅苍术挥发油诱导的MKN一45细胞胀亡的机制可能是诱导细胞膜形成了孔道，造成细胞内外渗透压失衡，形成的孔道可以通过分子量在4000以下的物质。6．茅苍术挥发油提取物诱导的MKN一45细胞胀亡的过程中，穿孔素蛋白的作用可能是

8、一条旁路途径，对胀亡的发生起协同作用，抑制其表达可以延缓但不能阻止胀亡的发生。7