腺病毒携带tnf-α-sirna和bmp-2基因抑制小鼠假体骨溶解的研究

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1、分类号：R6单位代码：10752密级：公开学号：2010352宁夏医科大学硕士研究生学位论文腺病毒携带TNF-α-siRNA和BMP-2基因抑制小鼠假体骨溶解的研究ExperimentalstudyoftheOsteolysisonmiceprostheticlooseningmodelrestrainedbyRecombinantadenovirusAd-TNF-ɑ-siRNA-BMP-2学位申请人：余博指导教师：金群华教授申请学位门类级别：医学专业名称：外科学研究方向：关节外科所在学院：临床医学院论文完成日期：二○一三年四月宁夏医科大学研究生部NingxiaMe

2、dicalUniversityThesisforApplicationofMaster’sDegreeExperimentalstudyoftheOsteolysisonmiceprostheticlooseningmodelrestrainedbyRecombinantadenovirusAd-TNF-ɑ-siRNA-BMP-2Student’sName:YuBoSupervisor：Jin-QunhuaAssistantsupervisor:SubjectCategory:MedicalMajor:SurgerySpecialty:Orthopedicsurge

3、rySchool:ClinicalCollegeCompletionDate:Apr.2013宁夏医科大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，无抄袭及编造行为。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日宁夏医科大学关于学位论文使用授权的声明宁夏医科大学有权保留使用本人学位论文，同意学校按

4、规定向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权宁夏医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。可以公布（包括刊登）论文的全部或部分内容。（保密论文在解密后应遵守此规定）论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日宁夏医科大学硕士研究生学位论文中文摘要腺病毒携带TNF-α-siRNA和BMP-2基因抑制小鼠假体骨溶解的研究摘要目的：通过携带有TNF-ɑ-siRNA（Tumornecrosisfactor-asmallinterferingRNA，肿瘤坏死因

5、子a小干扰RNA）和BMP-2（BoneMorphogeneticProtein-2，骨形成蛋白2）基因的重组腺病毒对小鼠假体骨溶解模型的干预及评估，探讨联合基因治疗人工关节假体周围骨溶解的可能性。方法：取8-10周龄BABL/C雌性清洁级小鼠240只随机分为5组，每组48只：空白对照(A)组建立假体模型，阳性对照(B)组、BMP-2治疗（C）组、TNF-α-siRNA治疗（D）组、联合基因治疗（E）组均建立假体松动模型。建模后两周各组分别注射（PBS+24h后PBS）、（钛颗粒悬浊液+24h后PBS）、（钛颗粒悬浊液+24h后Ad5-BMP-2）、（钛颗粒悬浊液+

6、24h后Ad-TNF-α-siRNA）和（钛颗粒悬浊液+24h后Ad-TNF-α-siRNA-BMP-2），各40ul，每隔两周重复一次，正常喂养16周。各组分别于12、16周行显微CT扫描，后取材做HE、TRAP（TartrateResistantAcidPhosphatase，抗酒石酸酸性磷酸酶）、免疫组化染色，4、8、12、16周取材ELISA法检测假体周围TNF-α、BMP-2表达量。结果：显微CT、HE染色显示，同时间点，B、C、D、E、A组假体周围骨密度（BMD）及骨体积分数（BVF）依次增高，差别有统计学意义（P<0.05）；炎性细胞组成的界膜组织厚度

7、依次降低，除D、E之间差异没有统计学意义（P>0.05）外，其他各组之间差异具有统计学意义（P<0.05）；12、16w比较，仅有B、C组BMD、BVF出现降低，界膜增厚，差别有统计学意义（P<0.05）。TRAP染色显示，同时间点，D、E组的破骨细胞数较B、C组有明显减少，但较A组多，且差别有统计学意义（P<0.05）；D、E组比较，B、C组比较破骨细胞数差别无统计学意义（P>0.05）；各组12w、16w比较，仅B、C组破骨细胞出现增长，差别有统计学宁夏医科大学硕士研究生学位论文中文摘要意义（P<0.05）。TNF-α表达量与免疫组化染色光密度值（IOD）呈