腺病毒sirna干扰抑制rhoa基因及联合tnf-α增加肝癌细胞凋亡的研究

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1、，济南大学至圭姜当篓耋舅葛舅葛皇鼍鼍舅置lIIIMiillllllllffllillllllJllUIr,IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII[IIIIIIIIIIIIIIIIIHIl!篡量量曼罾皇量罾皇曼鲁曼曼曼舅邑量皇蔓量量璺墨Y2129425研究生导师简介：闫歌：男，生于1965年9月19日，山东省莱芜市人，博士。现任山东省寄生虫病防治研究所副所长，研究员，硕士生导师。省医科院重点学科(寄生虫分子免疫学)学术带头人。近年来为首和为主承担完成了国家级、省部级课题lO多项；多项课题获科技成果奖，包括首届山东省十大科技成果奖、山东省

2、科技进步二等奖，山东省科技进步三等奖等。在SCI、国家核心期刊发表论文40余篇，主要研究方向：寄生虫和肿瘤分子生物学。课题指导小组简介：黄炳成，男，1962年2月生，研究员，现任山东省寄生虫病防治研究所中心实验室主任，主要从事寄生虫分子生物学和免疫学研究。魏庆宽，男，1969年1月生，副研究员，现任山东省寄生虫病防治研究所中心实验室副主任，主要从事寄生虫分子生物学和免疫学研究。张佃波，男，1964年9月生，研究员，主要从事寄生虫分子生物学和免疫学研究。公茂庆，男，1965年10月生，博士，研究员，硕士生导师，副所长。山东省医药卫生重点学科(医学

3、昆虫学)学术带头人，主要从事媒介分子生物学和寄生虫分子生物学研究。原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名：缝日期：丝!兰!垒：兰望论文作者签名：名竺墅日期：丝!兰!垒：兰望关于学位论文使用授权的声明本人完全了解济南大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复

4、印件和电子版，允许论文被查阅和借鉴；本人授权济南大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。厶开口保密(年，解密后应遵守此规定)论文作者签名：查翌导师签名：数嗍丛19济南大学硕士毕业论文目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯Ⅳ主要符号表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．V前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1日U吾⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．第一部分RhoA基因siRNA重组腺病毒的构建一、材料和方法⋯⋯⋯⋯．．．．⋯⋯⋯一⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯．一．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．41、实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41．1材料试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41．2仪器和器材⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯51．3试剂配制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯62、实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．82．1．

6、腺病毒载体pAsiRNA的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．82．2．腺病毒的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯ll2．3．腺病毒的扩增⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯．142．4．腺病毒的纯化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯142．5．腺病毒滴度的测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯15二、实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一151．RhoA腺病毒siRNA的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯152．腺病毒Adsi

7、RNA的制备、扩增⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．183．腺病毒AdsiRNA的纯化、滴度测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．19第二部分siRNA腺病毒钵外抑制肝癌细胞RhoA基因韵研究一、材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．201、实验材料⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯．一．．⋯⋯．201．1材料试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯20腺病毒siRNA干扰抑制RhoA基因及联合TNF—Q增加肝癌细胞的凋亡研究1．2仪器和器材⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

8、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯201．3试剂配制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2l2、实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯