脂联素对骨关节炎滑膜细胞及软骨干细胞作用的研究

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1、学校代码：10023学号：B2010001023博士学位论文脂联素对骨关节炎滑膜细胞及软骨干细胞作用的研究所院：专业：姓名：指导教师：导师小组：研究方向：完成日期：北京协和医院外科学左伟邱贵兴教授吴志宏教授骨与关节疾病2013年4月中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院博士学位论文目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯．⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯3Abstract⋯．．．．．⋯⋯．⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．．．⋯．．4前言⋯．．．．．⋯⋯．．．．．⋯．．．⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．⋯．．．．．．⋯．6日U舌⋯．．．．．⋯⋯．．．．．⋯．．．⋯⋯．⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯．．．⋯······⋯·D参考文献⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯．．．．⋯⋯9第一部分脂联素对0A患者滑膜细胞作用的研究⋯⋯．⋯．⋯⋯⋯．⋯．．13材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯．⋯．．13结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．25讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．31参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35第二部分软骨干细胞的分离与鉴定⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．40材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯40结果⋯⋯⋯⋯．．．．⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．48讨论．⋯．．⋯⋯⋯．⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．．⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯56参考文献．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．⋯．．．．⋯⋯．．．⋯．61第三部分脂联素对软骨干细胞成软骨分化作用的研究⋯⋯．⋯⋯⋯．⋯．．67材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．67结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．69讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．7l参考文献⋯⋯．．．．．⋯．．．．．．．．．．．．．．⋯．．⋯⋯．．．．⋯⋯⋯⋯．．73全文总结⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯．75英文缩略词表⋯⋯．．．．．．⋯．⋯⋯⋯．．⋯⋯．⋯⋯．．．⋯一．．．．．⋯．76综述⋯

4、⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯．．⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯80参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯．⋯．88致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯．．．．95个人简历⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯．⋯．96中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院博士学位论文中文摘要目的：分析脂联素受体在关节炎滑膜细胞中的表达情况，研究脂联素对滑膜细胞PGE2产生的影响及其机制；从晚期骨关节炎患者关节软骨中分离出软骨干细胞，对其“干性”进行验证；探讨脂联素对软骨干细胞成软骨能力的影响。方法：分别从基因和蛋白水平比较脂联素受体(AdipoR)在骨关节炎(OA)

5、和类风湿性关节炎(RA)滑膜细胞中的表达差异，探讨脂联素对滑膜细胞PGE2产生的影响，并对其机制做初步的研究；采用CDl46标记，流式细胞分选的方法从晚期骨关节炎关节软骨中分离出软骨干细胞，对其克隆形成能力，表面分子，成骨、成脂、成软骨能力进行检测，并和脂肪干细胞的分化能力进行对比，最后在体外诱导软骨干细胞成软骨分化时用脂联素进行干预，观察脂联素对软骨干细胞成软骨分化能力的影响。结果：脂联素受体AdipoR1和AdipoR2在OA和RA滑膜细胞中均有表达，且AdipoR1在RA滑膜细胞中的表达要明显强于OA，而AdipoR2在两种细胞间的表达无明显差异。当

6、给予脂联素刺激时，OA和RA滑膜细胞均能产生大量PGE2，且RA滑膜细胞PGE2产生的量要明显高于OA滑膜细胞；当给予两种细胞AdipoR1基因敲除后，RA滑膜细胞和OA滑膜细胞PGE2的释放量无明显差异，当敲除AdipoR2后，RA滑膜细胞PGE2的释放量仍明显高于OA滑膜细胞。当脂联素刺激OA滑膜细胞时，可以发现PGE2合成相关基因COX．2、mPGES．1表达量上调，且非甾体抗炎药和COX．2抑NIIII够抑Nil联素诱导的OA滑膜细胞POE2的释放。从OA关节软骨中分离出的软骨干细胞，其表面表达有与其他类型间充质干细胞相似的表面分子，有较高的克隆形

7、成能力，并能成功的向脂肪、骨、软骨细胞进行诱导分化；和脂肪干细胞相比，软骨干细胞具有较强的成软骨能力，但成骨和成脂肪能力不如脂肪干细胞。在成软骨诱导过程中，当加有脂联素时，会减弱软骨干细胞的成软骨分化能力。结论：脂联素能促进关节炎滑膜细胞PGE2的释放，且AdipoR1在炎性反应中起着更为重要的作用。退变关节软骨中存在有软骨干细胞，且脂联素能抑制软骨干细胞的成软骨分化能力，说明脂联素除了能在成熟细胞水平促进OA的发展，还能在干细胞水平干预干细胞参与的组织修复。关键词：骨关节炎；脂联素；干细胞；关节软骨；CDl46；成软骨分化中国医学科学院北京协和医学院北京

8、协和医院博士学位论文Absractobjective：Toanal