利用酵母双杂交系统筛选甘蓝型油菜atp6的相互作用蛋白质

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1、2010年7月四川大学学报(自然科学版)Ju1．2010第47卷第4期Journa1ofSichuanUniversity(Natura1ScienceEdition)Vo1．47No．4doi：103969／j．issn．0490—6756．2010．04．041利用酵母双杂交系统筛选甘蓝型油菜ATP6的相互作用蛋白质孙力，李娜娜，余渝，柴靓，王健美，杨毅，李旭峰(四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室，成都610064)摘要：通过酵母双杂交系统，以ATP6作为诱饵蛋白筛选与ATP6有相互作用的蛋白质．通过筛选和鉴定，获得了5个与ATP6有相互作用的蛋白质．其中一个与拟南

2、芥中内质网膜上的蛋白转运复合体中的口亚基(Sec61a)有很高的相似性．通过TAILPCR和设计简并引物扩增初步得到了甘蓝型油菜Sec61a全长基因组序列和cDNA序列．并利用生物信息学分析手段对甘蓝型油菜Sec61a进行了比对和分析，推测该蛋白质可能参与了花粉的发育过程．关键词：ATP6；酵母双杂交；细胞质雄性不育；Sec61a；TAILPCR中图分类号：Q78文献标识码：A文章编号：0490—6756(2010)04—0899—07ScreeningofproteinsinteractingwithATP6inBrassicanapusbyyeasttwohybridsystemSUN

3、Li，LNa—Na，yUYu，CHAILiang，WANGJian—Mei，YANG，LXu—Feng(KeyLaboratoryofBio—ResourceandEco—EnvironmentofMinistryofEducation，CollegeofLifeSciences，SichuanUniversity，Chengdu610064，China)Abstract：Yeast—Two—Hybrid—Systemwasemployed，withATP6asabaitprotein，toscreenproteinswhichwouldinteractwithATP6．Fiveposit

4、iveproteinswereobtainedandoneofthemwasfoundtohavehighsimilaritywithputativeasubunitofproteintranslocationcomplex(Sec61a)inendoplasmicre—ticulumofArabidopsisthaliana．Then，TAILPCRandgradationPCRwithdegeneratedprimerwereusedtoamplifythecompletecDNAandgenomicDNAsequenceswhichwereanalyzedbymeansofbioin

5、—formatics，inferringthatthisproteinmaybeinvolvedinthedevelopmentofpollen．Keywords：ATP6，Yeast—Two—Hybrid，CMS，Sec61a，TAILPCR具有很高的实用价值．油菜(BrassicanapusL．)是1引嗣世界上重要的油料作物之一，对于油菜中雄性不育细胞质雄性不育(cytoplasmicmalesterility，的研究有重大意义[1]．到目前为止越来越多的研究CMS)是广泛存在于高等植物中的一种自然现象，表明线粒体DNA(mitochondria1DNA，mtDNA)表现为母体遗传、花

6、粉败育和雌蕊正常，这种遗传与其表达产物与CMS相关[2]．通过比较分析限制特点可以在杂交育种中免去人工去雄的繁杂工作，性内切酶水解线粒体的基因组DNA得到的物理提高杂交种子的纯度和保证杂种一代的增产效应，图谱，发现与CMS相关的线粒体DNA序列大都收稿日期2009-03—24基金项目国家自然科学基金项目(30971816，30740056)作者简介孙力(1983一)，四川成都人，四JJI大学生命科学学院遗传学专业2006级硕士研究生通讯作者李旭峰．E—mail：yangyi528@vip．sina．corn900四川大学学报(自然科学版)第47卷和编码ATP合成酶亚基的基因ATP6相关[3

7、“]．2．2实验方法在高粱和水稻中，ATP6被证实与育性相关．6]．在构建dscDNA文库，诱饵载体(pGBKT7一甘蓝型油菜体细胞杂合子也发现油菜波里马CMSATP6)，并将诱饵载体转化到酵母菌株AH109．株系的后代都含有0l尺F224／ATP6座位，而且该以上步骤由本实验室其他师生完成n。J．位点与植株CMS性状高度连锁]．在油菜波里马用经过验证的带有pGBKT7一A丁P6的CMS株系中，ATP6与0RF224“共