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《低氧后处理诱导钙网蛋白表达上调的心肌保护机制》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、生理学报ActaPhysiologicaSinica,February25,2009,61(1):35-4235http://www.actaps.com.cn研究论文低氧后处理诱导钙网蛋白表达上调的心肌保护机制徐菲菲，刘秀华*，张振英，蔡莉蓉中国人民解放军总医院病理生理研究室，北京1008532+摘要：钙网蛋白(calreticulin,CRT)是内质网(endoplasmicreticulum,ER)/肌浆网(sarcoplasmicreticulum,SR)中主要的Ca结合2+分子伴侣，参与调节细胞Ca稳态和协助蛋白质折叠，在内源性保护现象——缺血后处理(is
2、chemicpostconditioning,I-postC)过程中表达上调，但其发挥作用的分子机制尚未完全阐明。本工作在原代培养Sprague-Dawley(SD)乳鼠心肌细胞低氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)模型上，采用反义寡核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotides,AS-ODNs)抑制CRT表达，观察低氧后处理(hypoxicpostconditioning,H-postC)过程中CRT下游分子钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)活性以及CaN、核转录因子κB(nuclearfactorka
3、ppaB,NFκB)、凋亡相关分子Bcl-2、Bax、C/EBP同源蛋白(C/EBPhomologousprotein,CHOP)等蛋白表达变化，及其与细胞保护的关系。心肌细胞随机分为6组(n=4)：对照组、低氧/复氧(H/R)组、低氧后处理(H-postC)组、AS-ODNs抑制CRT表达(AS)组、AS+H/R组和AS+H-postC组，采用台盼蓝排斥实验、培养基乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase,LDH)活性测定及流式细胞术检测细胞损伤；经Fluo-3/AM染色，采用激光共聚焦显微镜测定细胞2+浆游离Ca浓度；采用对硝基磷酸酚(p-nitro
4、phenylphosphate,PNPP)底物发色法测定CaN活性；Westernblot检测相关蛋白表达。结果显示：(1)H-postC可减轻H/R诱导的心肌细胞损伤，与H/R组比较，细胞存活率升高17.1%，凋亡率和LDH漏出分别降低6.67%和27.9%(P均<0.05)；(2)H-postC轻度上调CRT，AS-ODNs抑制CRT表达后，部分消除后处理的心肌保护作用，与H-postC组相比，AS+H-postC组细胞存活率降低8.98%、凋亡率和LDH漏出分别升高1.74%2+和13.6%(P均<0.05)，而胞浆游离Ca浓度、CaN活性、CaN及NFκB表
5、达均未发生明显变化(P>0.05)，提示CRT参与2+后处理保护，但不是通过胞浆Ca-CaN途径发挥作用；(3)H-postC抑制促凋亡蛋白Bax、CHOP表达(与H/R组相比，分别下调54%和51%,P<0.05)，诱导抗凋亡蛋白Bcl-2上调(与H/R组相比，上调99%，P<0.05)，抑制CRT表达部分减弱H-postC诱导的上述凋亡相关蛋白变化，提示H-postC诱导CRT上调可能通过调节凋亡相关蛋白表达参与心肌保护。综上2+所述，H-postC可降低胞浆Ca超载，减轻心肌细胞H/R损伤；CRT通过调节凋亡相关蛋白表达参与H-postC心肌保护，2+而不是通
6、过Ca-CaN途径发挥抗凋亡作用。关键词：钙网蛋白；钙调神经磷酸酶；钙；离子超载；缺血后处理；低氧中图分类号：R363.2Cardioprotectivemechanismofcalreticulinup-regulationinducedbyhypoxicpostconditioningXUFei-Fei,LIUXiu-Hua*,ZHANGZhen-Ying,CAILi-RongDepartmentofPathophysiology,ChinesePLAGeneralHospital,Beijing,100853,China2+Abstract:Calreticu
7、lin(CRT)isanessentialCa-bindingchaperoneexistinginendoplasmicreticulum(ER)orsarcoplasmicreticulum2+(SR),andisinvolvedinintracellularCahomeostasisandproteinfolding.Ischemicpostconditioning(I-postC),anewlydiscoveredendogenousprotectivephenomenon,inducesCRTup-regulation.Thepresentstudya
