低氧诱导因子在兔慢性缺血心肌中的表达趋势

《低氧诱导因子在兔慢性缺血心肌中的表达趋势 》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、低氧诱导因子在兔慢性缺血心肌中的表达趋势徐夏红，王强，董红燕　姜波，张中明【摘要】目的探讨低氧诱导因子-1α(hypoxia-induciblefactor-1α，HIF-1α)在兔缺血心肌的表达趋势。方法建立兔缺血心肌动物模型，于冠状动脉结扎前及术后第2、4、6、8、10、12周取各组动物缺血区心肌组织，采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(Q-RT-PCR)法测定心梗区HIF-1αmRNΑ的表达;应用免疫组化及ethodsAnimalmodelsofmyocardialischemiaalsepointsofischemia.Myocardi

2、umfromischemiclocusineachrabbitmunohistochemicalstaining,real-timefluorescentquantitativereversetranscriptase-polymerasechainreaction(RT-Q-PCR)andtheonsetofischemia,thereRNAandproteinlevelsodalpatternofelevation:thelevelsofHIF-1αmRNAandproteinreachedtheirfirstpeaksatthe2nda

3、nd4thia,folloainedhigherthanthepre-ischemialevels(P0.01).ConclusionTheexpressionofexogenousHIF-1αiscloselyrelatedtotheoxygensupplyintheinfarctedloci.Duringtheearlystageofischemia,upregulatedHIF-1αisinvolvedtomaintaintissueoxygenhomeostasis,targetgenesandenhancesmyocardialox

4、ygensupply,yocardialischemia;geneexpression;rabbit　　低氧诱导因子(hypoxia-induciblefactor，HIF)是调节血管新生的重要细胞生长因子，参与多种缺血缺氧性疾病的病理生理过程[1]。它主要通过与一系列缺氧反应靶基因的特定结合位点——缺氧反应元件(hypoxicresponseelement，HRE)结合，精确地调控下游多种重要的调节血管新生基因的表达，从而有效地改善缺血缺氧组织及器官的功能。　　低氧状态下，HIF-1α基因表达迅速上调，但在长期的缺血心肌中HIF-1α的表达

5、及变化趋势，国内外鲜见研究报道。本研究在动物整体水平，探讨在较长期心肌梗死过程中，内源性HIF-1α基因的表达水平及变化趋势，旨在为深入研究HIF在心肌梗死病理生理中的作用，探讨其对下游基因的调控作用提供实验依据[2]。　　1材料和方法　　1.1实验材料和动物　　1.1.1实验动物健康纯种中国大耳白兔，雌雄不限，共42只，体重2～2.5(2.3±0.15)kg，由徐州医学院实验动物中心提供。　　1.1.2实验材料Q-RT-PCR试剂盒(上海基康公司)，Trizol裂解液(北京鼎国生物公司)，KODDNΑ聚合酶及ReverTraAce逆转录酶(

6、Toyobopany，Japan);HIF-1α单克隆抗体(小鼠抗兔，Chemiconpany，USS);SP免疫组化试剂盒及DΑB显色试剂盒(北京中山生物公司)。　　1.2实验方法　　1.2.1心肌缺血动物模型的制作动物麻醉后，胸部正中切口开胸，显露心脏。显露左冠状动脉的左室降支。在其中上1/3交界处以6/0无损伤丝线缝扎。结扎点下方及心尖部可见局部心肌颜色青紫，确认局部心肌缺血后关胸。常规饲养，术后连续3天肌内注射青霉素20万U预防感染。　　1.2.2实验分组根据缺血时间差异，将动物模型随机分为6组(每组6只)。分别于缺血后第2、4、6、

7、8、10、12周再次开胸，快速取缺血标记区心肌组织;对照组(6只)取正常左心室心肌。获取的心肌组织分别以液氮保存(Q-RT-PCR及)-FCΑGCΑΑGTCCTTCTGΑTGGΑΑGCΑCCΑP-(TΑMRΑ)p-3＇。PCR实验方法参照试剂盒说明书进行，采用AB7300实时荧光定量PCR仪进行检测。　　1.2.3.3，etal.VEGF-initiatedblood-retinalbarrierbreakdoolVisSci,2001，42(10):2408-2413.　　[5]SemenzaGL，olCellBiol,1992，12(12

8、):5447-5454.　　[6]HuangLE，BunnHF.Hypoxia-induciblefactoranditsbiomedicalrelevance[J