血管内皮生长因子在兔眼前段缺血模型中的表达

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1、安徽医科大学硕士学位论文结合的形式存在，与肝素结合紧密几乎完全被细胞外基质所隐蔽，以贮备形式存f在11610VEGF的生物作用是通过受体其受体介导的。VEGF受体(VEGFR)主要有两种：fms一样酪氨酸傲酶(fms—liketyrosinekinase，FLT一1)和含激酶插入区受体(kinaseinsertdomaincontainingreceptor，KDR)。FLT一1、KDR是血管内皮细胞VEGF信号的主要换能器，促使VEGF诱导酪氨酸磷酸化、化学趋化性、促进细胞有丝分裂、肌动蛋白重组及介导内皮细胞增

2、殖分化的活性。FLT—I、KDR都是受体，结构相似，与VEGF有较高的亲和力，但比较起来KDR在与VEGF的亲和力、结合后所引起的受体磷酸化作用、结合后所引起的细胞反应、与肝素的结合能力等许多方面作用都强于前者[1710在众多新生血管性眼病(如增生性糖尿病视网膜病变、早产儿视网膜病变、新生血管性青光眼、视网膜静脉阻塞、年龄相关性黄斑变性等)中，VEGF表达与眼内新生血管形成在时间、空间上存在时间、空间上对应关系，是该过程中最主要的细胞因子。其机制为局部血液循环障碍、缺氧可导致VEGF表达上调，参与诱导视网膜新生血

3、管形成和发展。另外，糖尿病眼底病变、视网膜中央静脉阻塞等还可以引起眼前段新生血管。已有报导，糖网患者房水和玻璃体中VEGF表达上调，前者中浓度低于后者且呈正相关。推测缺氧导致视网膜色素上皮细胞、Muller细胞等大量分泌VEGF，后者破坏血一视网膜屏障，视网膜血管发生闭塞和新生血管等改变。这些改变加重了缺氧，VEGF进一步增加，通过房水循环进入前节，引起虹膜、小梁网新生血管，最终致青光眼¨81910也有实验表明，非人灵长类玻璃体腔内注射VEGF可导致虹膜新生血管形成和新生血管性青光眼。目前，动物模型已证明，眼内注

4、射VEGF受体的嵌合蛋白120]抗VEGF‘2¨及抗VEGFR啦!的单克隆抗体和VEGF的反义寡核苷酸啪1以及阻断细胞内信号系统n4’已不同程度的抑制了眼内新生血管的形成。1．3ASI与VEGFASI虽少见但预后差，目前无有效治疗。对于ASI的研究不多，具体机制不详，可能与局部循环障碍有关1251。ASI组织病理学改变表现为角膜、虹膜、睫状7安徽医科大学硕士学位论文体的缺血、炎症，晚期以上部位组织萎缩，甚至新生血管形成。VEGF既为多种眼部新生血管性疾病的关键因素，且眼后段的VEGF也可以通过房水循环导致前段的新

5、生血管，提示其可能在ASI的发病中起重要作用，并可能为ASI的预防、诊断和治疗提供新的思路。2材料与方法2．1主要试剂(1)鼠抗兔VEGF抗体(NeoMarkers公司提供，编号：MS．350)(2)UltraSensitiveSP试剂盒(内含A内缘性过氧化酶阻断剂B正常非免疫动物血清C生物素标记的第二抗体D链霉菌抗生物素蛋白一过氧化酶福建迈新生物技术开发有限公司提供，编号Kit-9709)(3)DAB试剂盒(福建迈新生物技术开发有限公司)(4)磷酸盐缓冲液(PBS)、多聚赖氨酸(北京中山公司提供)(5)4％甲醛

6、、2．5％戊二醛、浓硫酸／浓盐酸、苏木素、伊红、二甲苯、酒精、蒸馏水、TrisHCL、中性树胶(安徽医科大学中心实验室提供)2．2主要仪器(1)Leica石蜡切片机(RM2135型，德国)(2)切片漂烘温控仪(QP-B型，安徽电力科学研究所)(3)隔水式电热恒温培养箱(PYx—DHS40X50一BS型，上海跃进医疗器械厂)(4)电子天平(Jh2100l型，上海精科天平厂)(5)NikonE800u高级研究用生物显微镜(日本)(6)Spot2彩色数码CCD摄像头(DlagbsticImagingCrop)(美国)(

7、7)OLYMPUS显微镜(日本)(8)眼科手术显微镜(苏州医疗器械厂)(9)裂隙灯显微镜(苏州医疗器械厂)(10)JEM--1230投射电子显微镜(日本电子公司)8安徽医科大学硕士学位论文(11)抗原修复微波炉、冰箱、高压锅、载玻片、盖玻片、烧杯、量简等。(安徽医科大学第一附属医院中心实验室提供)2．3兔ASI模型的建立2．3．1实验动物健康成年新西兰白兔26只，体重2-3kg，雌雄兼用，双眼均在裂隙灯显微镜下检查以排除眼部病变。(动物和饲料均由安徽省安立试验动物有限公司提供)。2．3．2分组情况26只新西兰兔随

8、机选取2只(4眼)作为正常对照(N组)，不行任何手术。其余24只随机分为A、B、C三组(A组16只、B、C组分别4只)。左眼对照，行球结膜环形切开；右眼造模。A组切断右眼上、下、内、外四条直肌；B组切断右眼上、下、内三条直肌；c组切断右眼内、外两条直肌。术后每天点抗生素眼水，裂隙灯观察眼前段。A组16只兔子随机分为1、3、7、14四小组于术后第l、3、7、14天，每组分别