tlr诱导nf-κb活化上调nlrp3表达的机制研究

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1、分类号：R392密级：⑧∥单位代码：10422学号：200913155菇办孑硕士学位论文论文题目：TLR诱导NF—KB活化上调NLRP3表达的机制研究TLR-inducedNF—KBactivationregulatesNLRP3expressioninmurinemacrophages作者姓名学院名称专业名称指导教师合作导师乔羽2012年5月15日原创性声明Y删㈣211{

2、11㈣8⋯111

3、11llfil3川6㈣7ⅢI{本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，

4、本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名：』耻日期：翌兰：±!兰圭关于学位论文使用授权的声明本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名：扯导师签名：

5、甏虹日期：三盟地山东人学硕Ij学位论文论文目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·l英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．8符号说明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．16论文正文材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·51讨{仑⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯61结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯63参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·64山东人学倾l‘学位论义ContentsChineseAbstract⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

6、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·lEnglishAbstract‘····························‘············-··································--·8Abbreviation⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·16TextIntroduction⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··18MaterialandMethods⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··23Results⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

7、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯-·51Discussion⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯61Conclusion⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯63Reference························································································64山东人学硕I：学位论文TLR诱导NF．KB活化上调NLRP3表达的机制研究专业：免疫学研究生：乔羽导师：高成江中文摘要目的NLRP3(NOD—LRRSc

8、ontainingpyrindomain3)是NLR(NOD—likereceptor)家族成员之一，NLRP3炎症小体在caspase．1的活化和IL．1B的成熟分泌过程中起重要的作用。目前NLRP3的研究多侧重于炎症小体的活化机制，而NLRP3表达调控机制尚不清楚。本课题研究目的在于阐明NLRP3表达调控的分子机制。本课题研究发现在小鼠巨噬细胞内TLR配体能够上调NLRP3mRNA和蛋白的表达，并且这一上调作用依赖于NF．rd3的活化。通过构建一系列NLRP3启动子区不同长度的截短突变体荧光报告基因载体，并对其荧光报告基因活

9、性分析，我们在NLRP3启动子区找到两个NF．rd3的结合位点(nt．1303to．1292和nt一1238to．1228)，并且用ChIP和EMSA的方法进一步验证NF．rd3和NLRP3启动子的直接结合作用。本课题阐明了NF．vd3和NLRP3启动子区nt．1303to．1292和nt．1238to．1228这两个位点特异性结合，从而上调NLRP3的表达的分子机制。方法1．检测TLR配体诱导的小鼠巨噬细胞内NLRP3表达情况1．1LPS／PGN刺激小鼠腹腔原代巨噬细胞，RT-PCR和Westernblot检测NLRP3mRN

10、A和蛋白的表达1．2LPS／PGN刺激RAW264．7细胞系，RT-PCR和Westernblot检测NLRP3mRNA和蛋白的表达2．检测NF—KB抑制剂(JSH。23)预处理小鼠巨噬细胞，TLR配体诱导的NLRP3山东人学f砚I‘学位论义表达情况2．1NF．