乌贼墨糖胺聚糖制备、理化性质、结构与生物活性的研究

《乌贼墨糖胺聚糖制备、理化性质、结构与生物活性的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、原创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名:日期:关于学位论文使用授权的声明本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅;本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印

2、、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名:导师签名:日期:山东大母硕士_学位论文乌贼墨糖胺聚糖的制备、理化性质、结构与生物活性研究研究生李孝东导师王凤山教授摘要乌贼墨是当乌贼遇到天敌时喷出的一种防身物质，是由黑色颗粒组成的豁稠的混悬液。鲜乌贼墨中含有水分、色素、蛋白质、脂肪、糖类等物质，比例为75:15.5:6.3:3.0:0.2。乌贼墨的主要化学成分为黑色素和蛋白多糖复合体。国内外研究表明乌贼墨具有抗肿瘤、止血、升高白细胞及抗辐射等作用。日本科学家首先从乌贼墨中提取得到了一

3、种具有高效抗肿瘤活性的肤聚糖，其多糖部分主要由等摩尔比例的GIcUA.Ga1NAc和Fuc构成，该多糖没有抗肿瘤活性:进一步研究证明该多糖是一种新型结构的GAG，糖链结构为[-)6GalNAca(1-3)G1cUA(3(1--3)Fuca(1~〕n。然而对于不同种属乌贼墨中是否含有相同结构的GAG，并且其生物活性是什么尚未见报道。GAG因其具有抗凝血、抗肿瘤、抗病毒、降血脂、增强免疫等生理作用，己成为研究较多的一类生物高分子。因此研究乌贼墨中的GAG，对于开发新的GAG，充分利用乌贼墨这种海洋资源具有重要的意义。本文从曼氏无

4、针乌贼(SepiellamaindronideRochebrune)的墨汁中提取得到了一种GAG，对其理化性质、糖链结构进行了初步研究分析，并对其生物活性进行了探讨，为进一步研究和开发乌贼墨GAG打下了基础。研究的内容和取得的结果如下。1乌贼墨GAG的制备方法和理化性质研究采用胰蛋白酶、链霉蛋白酶两次酶解，氯仿处理除去蛋自质，通过乙醇沉淀、DEAE一纤维素离子交换柱分离、SephadexG-25凝胶层析脱盐，从曼氏无针乌贼(SepiellamaindronideRochebrune)的墨汁中提取纯化得到了乌贼墨GAG;该乌贼

5、墨GAG为白色絮状物，无臭，无味，比旋度为一】2.72a醋酸纤维素薄膜电泳显示单一区带，其迁移率略低于硫酸软骨素。酉昔酸纤维素薄膜电泳证明乌贼墨GAG为均一性多糖:紫外扫描无蛋白质的特征吸收峰，并测得蛋白质含量为3.5%a;红外光谱山东大李硕士学位论文分析，样品具有典型的GAG吸收峰;该GAG完全酸水解后薄层色谱研究表明该GAG主要由的GaIN,G1cUA、和Fuc三种单糖组成，含量分别为26.5%,30.3%a,24.1%;乌贼墨GAG含有8.5%的硫酸基;结合红外光谱对官能团的分析，该GAG是由等摩尔比例的GaINAC,

6、G1cUA、和Fuc构成;采用高效液相排阻凝胶色谱法(HPGPC)测得乌贼墨GAG的重均分子量(Mw)为30499，数均分子量(Mn)为20766.2乌贼墨GAG的糖链结构研究采用高碘酸氧化、Smith降解等传统化学分析方法，结合I2,'H-NMR和"C-NMR等对该乌贼墨GAG的单糖构型、连接次序、糖昔键的位置等结构情况进行分析研究，推N9其主要结构为「--6)Ga1NAca(1-3)G1cUA(3(1--3)Fuca(1-]=03乌贼墨GAG的抗肿瘤、免疫活性及对CTX所致小鼠微核率的影响体外实验表明乌贼墨GAG不能够抑

7、制HepGZ肝癌细胞的生长，其1C5。为153.7pg/ml，说明其几无细胞毒活性。同时观察了乌贼墨GAG对S1a。实体瘤的影响几结果单独腹腔注射乌贼墨GAG对Sis。实体瘤无抑制作用;与CTX联合应用亦不能提高CTX的抑瘤率，但可明显改善荷S180小鼠的症状，并降低小鼠死亡率。单独腹腔注射乌贼墨GAG，荷瘤小鼠的胸腺指数、脾脏指数均未变化，说明其对小鼠无毒副作用。与CTX联合应用，高剂量组胸腺指数、脾脏指数及白细胞数明显增大，提示乌贼墨GAG能提高荷瘤小鼠免疫功能，对CTX所致荷瘤小鼠胸腺和脾脏萎缩有保护作用。初步考察了乌

8、贼墨GAG对于离体淋巴细胞功能的影响。MTT法研究结果显示乌贼墨GAG在3.125^100gg/ml对ConA活化和未活化的小鼠脾淋巴细胞增殖均具有一定兴奋作用;腹腔注射乌贼墨GAG20mg/(kg"d)，体外试验对由ConA诱导的荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖有明显的促进作用;3H-TdR法研究