金樱子总黄酮的制备与生物活性研究

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1、金樱子总黄酮的制备及其生物活性研究硕士研究生：刘月涛指导教师：彭金咏教授专业名称：微生物与生化药学摘要目的：制备金樱子总黄酮(TFs)并考察其生物活性。方法：本研究主要从以下方面进行：(1)TFs的制备及质量。以总黄酮的含量为测定对象，利用正交试验法优选总黄酮的提取工艺条件：通过D101大孔树脂工艺制备高纯度的总黄酮(TFs)；并通过HPLC指纹图谱和对水解产物黄酮苷元的测定来建立质量标准。(2)总黄酮体内外抗氧化活性实验。在体外考察其对DPPH(1，1．二苯基一2一三硝基苯肼)、·OH(羟基自由基)、·O。2(超氧阴离子)和H202(

2、过氧化氢)的清除作用以及还原力的测定，并考察了其对红细胞溶血和脂质过氧化的抑制作用，以维生素C(VitC1作为阳性对照。此外，通过给药后小鼠血清、肝和肾组织中T-AOC(总抗氧化能力)，SOD(超氧化物岐化酶)和MDA(丙二醛)水平的变化来评估它的体内抗氧化能力。(3)总黄酮对小鼠高脂血症的保护作用及其机制研究。正常小鼠分别给予高脂饮食和不同给药剂量总黄酮(25，50mg／kg，i．g．)，并以非诺贝特为阳性对照。实验结束后，通过测定血清的TC(总胆固醇)、TG(甘油三酯)和HDL．C(高密度脂蛋白)的水平评价其降脂活性。通过组织病理学

3、、ALT(谷丙转氨酶)、AST(谷草转氨酶)和ALP(碱性磷酸酶)等指标的测定探讨总黄酮对高脂饮食所致的脂肪肝的保护作用。此外还考察了其对实验动物中体内抗氧化系统的影响。(4)总黄酮对高脂血症大鼠的治疗作用及其血液流变学影响。造模后的高脂大鼠给予总黄酮(100mg／kg)和阳性对照药非诺贝特4周。实验结束后测定血清的TC、TG和HDL．C水平评价其降脂活性。并通过测定血液流变学的变化来验证其降脂活性。(5)总黄酮对扑热息痛诱导的急性小鼠肝损伤的保护作用及其机制研究。在这项研究中，小鼠分别被灌胃不同剂量的总黄酮(50和200mg／kg)和

4、联苯双酯(100mg／kg)5天，在最后一次给药2h后，除空白组所有实验动物腹腔注射扑热息痛(400mg／k91。实验结束后，测定血清的ALT、AST、MDA、SOD和GSH(谷胱甘肽)等指标来考察TFs对肝损伤的保护作用和体内抗氧化系统的影响。并通过Westernblotting、免疫组化和RT-PCR等技术来考察相关蛋白和mRNA的表达水平。(6)通过急性毒性试验来初步考察金樱子总黄酮的毒性。结果：正交试验法优化的金樱子最佳提取条件是用8倍量的60％乙醇回流提取2h，共2次；Dl01树脂制备工艺是用4倍树脂柱床体积的水除杂和6倍树脂

5、柱床体积的40％乙醇洗脱得到纯度为78．45％的TFs。产物经水解后经HPLC分析显示槲皮素、山柰素、异鼠李素的总含量为7．37％。体内外抗氧化活性实验显示TFs对DPPH、·OH和·O。2有较强的清除作用，其IC50值分别为0．01、0．04和0．08mg／mL，还原力稍弱于阳性对照VitC。TFs在浓度为0．35mg／mL和2．00mg／mL时，还分别具有71．62％和48．45％的红细胞溶血和脂质过氧化的抑制作用。在体内抗氧化方面，TFs(100mg／kg)能明显提高血清和肝和肾组织中T-AOC和SOD的水平，并显著降低MDA；T

6、Fs在50mg／kg的给药剂量时，高脂血症小鼠血清TC、TO和LDL．C水平分别下降了45．02％、33．86％和73．68％，而HDL．C则显著高于模型组，与阳性药相比(分别降低39．22％、36．06％和76．08％)药效相当。组织病理学、ALT、AST和ALP等指标均显示TFs对肝脏具有良好的保护作用，其中，ALT、AST和ALP分别升高了55．85％、29．15％和25．68％。此外，TFs能显著降低MDA水平，提高CAT(过氧化氢酶)、SOD、GSH、GPX(谷胱甘肽过氧化酶)水平；TFs对高脂大鼠的治疗作用及其血液流变学研究

7、显示金樱子总黄酮在给药100mg／kg时对高脂大鼠的血清TC和TG分别极显著地降低了60．80％和62．39％(p<0．01)，略强于非诺贝特(40mg／kg，分别降低56．82％和56．99％)。TFs能降低全血比粘度(低切、高切)49．59％和63．24％(／9<0．01)，血浆比粘度、血清比粘度和RBC聚集指数均明显降低(p

8、H显著高于模型组(矽