rb94对人肺腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用及sphk表达影响的研究

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1、2010年第37卷第9期国肿瘤临481·基础研究·Rb94对人肺腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用及SphK表达影响的研究承张萍刘芳①栾力马道新王建波谭炳煦程玉峰摘要目的：Rb94基因转染裸鼠肺腺癌皮下移植瘤，观察Rb94基因对人肺腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用及对鞘氨醇激酶(sDhingosinekinase，SphK)表达的影响。方法：收集一定数量的对数生长期A549细胞，生理盐水重悬后每只裸鼠右后肢皮下接种5×106／0．1mLA549细胞悬液，待瘤体生长至一定体积后随机分为4组，分别为对照组、空载体组、脂质体组、转染Rb94基因组；每组裸鼠瘤体内分别注射PBS、质粒pIRES、脂质体(1i

2、pofectamine)、质粒pIRES—Rb94，观察肿瘤生长情况并检测抑瘤率；裸鼠脱颈处死后，采用Westembolt法检测瘤组织中Rb94基因表达情况，并采用实时RT—PCR和免疫荧光法(immunofluorescence，IF)观察其对裸鼠肺腺癌皮下移植瘤中SphK表达的影响。结果：对照组及转染组裸鼠在接种部位均有移植瘤生成；与空白对照组、脂质体组、空载体组相比，转染Rb94基因组的裸鼠移植瘤的生长速度明显减慢，肿瘤的体积较小，重量较轻，有显著性差异(P<0．05)，而3个对照组之间，无显著性差异(O．05)；空白对照组、空载体组、脂质体组抑瘤率分别为0、11．78％、7

3、．86％，而转染Rb94基因组平均抑瘤率高达51．99％，肿瘤生长明显抑制；SphK1在mRNA和蛋白水平表达下调而SphK2表达上调。结论：Rb94基因成功转染裸鼠肺腺癌皮下移植瘤；Rb94基因抑制裸鼠皮下肿瘤生长；Rb94基因抑制SphK1的表达，增强SphK2的表达。关键词鞘氨醇激酶A549细胞小鼠移植瘤doi：10．3969／j．issn．1000—8179．2010．09．00lInhibitoryActionoftheRetinoblastoma94GeneonHumanLungAdenocarcinomaandItsEfectontheExpressionofSphK

4、inaMouseXenograftModelZHANGPing’，LIUFang，LUANLi’，MADaoxin’。WANGJianbo’，TANBingxu’，CHENGYufeng’’DepartmentofRadiationOncology,QiluHospitalofShandongUniversity,Ji。nan，250012，ChinaDepartmentofRadiation，ShandongMedicalCollege，Jinan250002，ChinaGrantsupport：ShandongProvincialScienceandTechnologyDeve

5、lopmentPlan(2006GG3202008)AbstractObjective：ToconstructananimalmodelofplRES-Rb94transfectionoftheA549adenocarcinomacellstoinvestigatetheinhibitoryactionandefectontheexpressionofSphKinamousexenograftmode1．Methods：Cellsuspen-sionsat5x106／0．1mLweresubcutaneousIyinjectedintoflanksofeverynudemouse．

6、Thentheinoculatedmiceweredivid—edinto4groupsasfoIlows：withPBS；withlipofectamine；withplRESemptyvector；andwithplRES-Rb94．TheinhibitoryratewasobservedandtheexpressionoftheRb94genewasdetectedbyWesternblot．ThenitsefectonSphKexpressionwasdeterminedbyRT-PCRandimmunofluorescence．Results：Thegrowthoftum

7、orgraftwasobviouslyinhibitedinthetreatmentgroup．Theinhibitoryratioofthetransplantedtumorwas51．99％intheplRES-Rb94group，higherthanthatinthecontrolgroup(O)，lipofectaminegroup(7．86％)andplRESgroup(11．78％)，withsignificantdiferencesbetweenpIRE