去势对人前列腺癌裸鼠移植瘤mir-301a表达水平的影响

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1、河北医科大学硕士学位论文去势对人前列腺癌裸鼠移植瘤miR--301a表达水平的影响姓名：胡现斌申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：张勇201203中文摘要去势对人前列腺癌裸鼠移植瘤miR-301a表达水平的影响摘要目的：前列腺癌(prostaticcarcinoma，PCA)是泌尿系常见的肿瘤。近年来，随着我国人口老龄化和饮食结构的改变，前列腺癌的发病率有上升趋势。在我国前列腺癌患者被确诊后往往已经有骨及远处转移，而存活时间往往不超过5年，因此早期诊断及治疗已迫在眉睫。在局限性前列腺癌的患者实施根治性前

2、列腺切除术，大约有30％'-'40％会复发，这很有可能是在实施手术前已经有转移。早期前列腺癌为雄激素依赖性，通过积极的抗雄激素治疗能够延缓病情，而晚期却往往发展成为非激素依赖性的前列腺癌。在前列腺癌发展变化的过程中，向非雄激素依赖性的转化是最为恶性的事件，使得前列腺癌成为不可治愈的疾病。随着芯片技术的发展，人们通过对microRNA表达谱的研究，在不同的癌症以及癌症的不同阶段miRNA的表达出现显著差异，并且在许多癌症的早期阶段和发生发展的过程中起到了至为关键的作用。在前列腺癌中也有异常表达的miRNA，并

3、通过研究证实miRNA在前列腺癌的发病机制中占有重要作用，这对疾病的诊断和靶向治疗显示出良好的应用前景。我们选用人类前列腺癌LNCaP细胞株建立了人类前列腺癌裸鼠动物模型，探讨人前列腺癌LNCaP细胞荷瘤裸鼠去势后miR-301a和其宿主基因SKAT2的表达变化。方法：雄激素依赖的人前列腺癌细胞株LNCaP细胞用含有10％胎牛血清的RPMll640的培养基于37℃、5o％oC02培养箱中培养。当细胞处于对数生长期时，用0．25％胰蛋白酶消化后离心并计数，PBS稀释至细胞数量为5×108／mL。取备好的LNC

4、aP细胞悬液与等量的Ma仃igel混合均匀后，立即接种到裸鼠的右前肢腋部皮下，0．2mL／只，细胞的最终接种量为5X107／只。每4天用游标卡尺测量一次肿瘤的长径和短径，计算肿瘤体积，绘制肿瘤体积变化曲线图。待肿瘤长至体积为200mm3时，将LNCaP荷瘤裸鼠随机分成4组，每组6只。其中两组裸鼠按0．012ml／g的剂量给予4％水合氯醛腹腔麻醉后进行去势手术，常规切除双侧睾丸。另外两组裸鼠作为对照组仅按睾丸切除术方法进行操作，开腹但不切除睾丸。手术过程在严格的无菌条件下进行。观察到去势组肿瘤体积逐渐缩小的过

5、程中选择一个时间中文摘要点，处死一组去势荷瘤裸鼠和对照裸鼠，取出皮下肿瘤在电子天平上称取肿瘤湿重，作为第一次取材的肿瘤。然后在肿瘤缩小后又再次增长的过程中选择一个时间点，处死一组去势荷瘤裸鼠和对照裸鼠，取出肿块称重，作为第二次取材的肿瘤。两次取材均计算抑瘤率，剥离的肿瘤组织冻存于．80℃冰箱，留待抽提RNA。实时定量PCR检测移植瘤的miR-301a和SKA2的表达。结果：LNCaP荷瘤裸鼠去势组自去势的第二天开始，肿瘤体积就随时间逐渐减小，而正常对照的荷瘤裸鼠瘤体积随时间变化逐渐上升。到去势后的第13天，

6、去势组裸鼠肿瘤体积缩4,N(62．54-21．5)mm3，而对照组为(384．5-+60．6)mm3，前者是后者的20％，差异有统计学意义(P

7、g，是对照组的11．7％。然后去势组裸鼠肿瘤体积逐渐增大，到去势后的第41天，去势组的肿瘤体积增长到(364．54-97．3)mm3，对照组的体积增长到(925．84-143．6)mm3。此时处死裸鼠，取出肿瘤块，此为第二次取材。称量肿瘤块重量，去势组为(368．94-59．5)mg，对照组为(975．34-162．7)mg，抑瘤率为62．2％，差异有统计学意义(JP

8、5倍，差异具有统计学意义(P0．05)。利用realtimePCR技术，检测肿瘤组织中SKA2的mRNA表达水平。第一次取材的去势组裸鼠，SKA2的mRNA表达水平下降到对照组的O．5倍，差异具有统计学意义(P