人胃癌裸鼠移植瘤模型的建立.docx

《人胃癌裸鼠移植瘤模型的建立.docx》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、人胃腺癌裸鼠移植瘤模型的建立动物：BALB／c(nu／nu)裸小鼠，鼠龄6～10周，体重l5～25g，雄性。饲养在无特殊致病菌、空气洁净的净化工作台内，室内恒温、恒湿，定期消毒。笼具、垫料、饲料和饮水均经高压蒸气灭菌，并在无菌条件下适时更换。方法：收集培养的BGC-823细胞(癌细胞在含10%小牛血清的RPMI-1640培养液中，于CO2恒温孵育箱中培养，常规传代。)在细胞培养至对数期时，用RPMI-1640制成约2×l07个／ml细胞悬液，取0．2ml(4x106个BGC-823细胞/只)注入裸小鼠颈部皮下或者背部皮下，每组接种3只鼠，当皮下移植

2、瘤长至直径为lcm3左右时取出移肿瘤（大约在10d左右），及时放入含无血清培养液的平皿中，A再在超净工作台内修剪肿瘤组织，去除脂肪，结缔组织及坏死肿瘤组织，并用无血清培养液洗涤2次，将瘤组织切成约lmm×lmm×2mm的小块，加入适量的pbs备用。以戊巴比妥经腹腔注射麻醉裸鼠，常规消毒背部肩胛区，（切开局部皮肤）用无菌套管针抽吸准备好的2mm3大小瘤块，将其接种于裸鼠背部肩胛区皮下，建立祼鼠皮下移植的人体胃癌祼鼠模型。作鼠间传代(2只／代)。移植瘤生长特性：胃癌细胞接种后的第三天即可见到裸鼠接种处皮下出现结节，直径约1．5mm，质地较硬，在以后的几

3、天中，上述皮下结节没有继续增大，此阶段为肿瘤细胞生长的潜伏期(7-10d左右)。随后，裸鼠皮下的肿瘤结节开始缓慢生长．体积逐渐增大。大概(25-30d)传代后荷瘤鼠皮下移植瘤的生长情况与初代移植瘤相近。A具体操作：　1一般要求　　需在无菌条件下进行。可在接种罩、超净工作台或无菌室内操作。动物处死后，用新吉尔灭(1∶1000)或碘酊、酒精消毒，对每个实体瘤应分别用灭菌的外科器械切取，对腹水瘤则应分别用灭菌的空针抽吸。瘤块污染常是接种失败的主要原因，应予注意在高温季节操作时，应注意降温，可在盛有瘤源的器皿周围放置冰块。　　常用腋下部位皮下作为实体瘤接种

4、部位；肌肉接种则用大腿肌肉；腹水型接种于腹腔。2　瘤块的制备　　接种用的瘤块应选择接种后7－10d、肿瘤生长旺盛且无溃破而动物健康较好的瘤源动物，颈椎脱臼，固定于蜡板上，用碘酊及酒精消毒操作部位皮肤(消毒面应尽可能大一些)。切开皮肤、选择生长良好无坏死或液化的瘤组织。在无菌平皿内，剪成2－3mm3的小块。平皿内放置少许消毒的生理盐水缓冲液或其它营养液，以保存瘤块。平皿应放置在冰块上。用无菌套管针抽吸或向套管针内塞进一小瘤块，接种于同种受体动物右前肢腋窝皮下(接种部位皮肤应先用碘酊、酒精消毒)。接种操作时间应尽可能的缩短，从一个瘤块所取的材料一般应在

5、30min内接种完。3　瘤细胞悬液的制备　　如每次需要接种的动物数量较多时，可用瘤细胞悬液接种。具体方法为，在无菌操作下取瘤块，除去坏死组织，将数个瘤块混合，剪成小块，用玻璃组织匀浆器研磨，磨匀后放入无菌容器内，加生理盐水适量稀释成1∶3－1∶4的瘤细胞悬液。容器置冰块上，用空针抽吸，每次抽吸前应将细胞混匀。每个动物接种0.2mL。整个操作应在30min内完成。　　停止给予受试物之次日(或停止给予受试物后1－5d)处死动物，先称体重，后解剖皮下瘤块，称重。如对照组小白鼠肿瘤平均重量小于1g或20%鼠的瘤重小于400mg，大白鼠肿瘤平均重量小于2g，

6、表示肿瘤生长不良。在试验期间给受试物组鼠死亡超过20%，或平均体重(去瘤后)下降(自身对照)超过15%者，表示受试物的毒性反应。应当减少剂量重新试验。取平衡饲养1周的BALB/C裸鼠若干只，于第3d将瘤细胞悬液按0.5ml/只(含瘤细胞7.5X10e个)接种于BALB/C裸鼠左侧肋部皮下。BGC823单细胞悬液的制备：将BGC823细胞，用RPMI一1640培养基培养基(PH7.2，含10%胎牛血清，青霉素100U/ml，链霉素100U/ml)，于37度，5%C02，饱和湿度的C02培养箱中培养，2~3d传代一次。该细胞贴壁生长，呈多角形。实验时取

7、对数生长期细胞，用0.25%胰蛋白酶消化后机械吹打成单细胞悬液，1500rpm离心smin，弃上清液，用适量PBS配制成细胞浓度分别为1.5x1)/ml悬液，0.4%台盼蓝染色法测细胞活力在95%以上。18号的硬脊膜外穿刺针，把外面的套管针部分磨平磨尖（为什么要磨，看到实物你就明白了），里面的实体针不用磨。一次用6根左右就可以了，先用一个不锈钢饭盒之类的东西作一个手术包，把所有相关的手术器械（剪刀镊子什么的，包括接种针）都装进去，盖上盖子，8层纱布包裹，121度，半个小时。操作的时候在超净台里面进行无菌操作，接种针一字排开，一个塞个5、6根，然后一

8、起接种，一轮完了以后继续塞，不用消毒处理，但是接种的时候要保证无菌操作，如果接种针碰到什么非无菌的地方，这根针这次就不能接