大黄素对人肝癌裸鼠移植瘤细胞凋亡及aif、endog表达影响

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1、原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。作者签名：竭!旦日期：_兰竺L年三月章日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部

2、或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：i轻塑导师签名遂!垦日期：皂竺!三年上月生日11摘要研究背景与目的：原发性肝癌是最常见的恶性肿瘤之一，恶性程度高，生存期短，治疗棘手，目前肝癌的手术、介入化疗等技术虽有所提高，但疗效仍然不尽人意，故寻找新的低毒高效的药物迫在眉睫。大黄素(Emodin)是大黄、虎杖等多种中药的有效成分之一，大量研究发现大黄素对多种肿瘤细胞有较强的抑制和杀伤效应。机制研究发现

3、大黄素能通过死亡受体途径或线粒体通路，诱导Caspase依赖的细胞凋亡。本研究以人肝癌细胞株SMMC．7721的移植瘤裸鼠为研究对象，观察大黄素对移植瘤细胞凋亡及AIF、EndoG表达的影响，探讨大黄素体内抗癌机制。方法：采用裸鼠皮下接种癌细胞悬液的方法复制裸鼠人肝癌移植瘤模型，造模成功后将带瘤裸鼠随机分成对照组、25mg／kg大黄素组、50mg／kg大黄素组、100mg／kg大黄素组。对照组予腹腔内注射生理盐水+1％DMSO、实验组分别予腹腔内注射大黄素25mg／kg、50mg／kg、100mg／kg，连续注射14天。实验过

4、程中观察裸鼠的一般情况，测量瘤体体积，绘制肿瘤生长曲线图，计算肿瘤生长延迟时间。停药次日处死裸鼠，取病灶组织。应用原位末端标记法(Tunel)检测各组肿瘤病灶组织细胞凋亡，计算凋亡指数。并采用免疫组织化学方法检测各组AIF、EndoG蛋白表达情况，免疫荧光化学检测各组AIF、EndoG分布情况。结果：1．32只裸鼠均成功建立模型。试验过程中裸鼠一般情况正常，各组之间裸鼠体重无差异(P>0．05)。2．治疗结束后，与对照组相比，大黄素组裸鼠移植瘤的生长速度明显减慢，肿瘤的体积较小。各组瘤体平均体积(cm3)分别为：对照组(1．3

5、7+0．14)、25mg／kg大黄素组(O．86士0．08)、50mg／kg大黄素组(O．58+0．12)、100mg／kg大黄素组(O．38-4-0．09)；不同剂量大黄素组的肿瘤平均体积明显小于对照组(P<0．05)，且100mg／kg大黄素组瘤体积比50mg／kg大黄素组和25mg／kg大黄素组都显著减少(P

6、肿瘤细胞凋亡指数分别为：对照组(8．23+1．65)％，25mg／kg大黄素组(34．38-4-8．73)％，50mg／kg大黄素组(48．14+9．57)％，100mg／kg大黄素组(68．71+10．56)％。不同剂量大黄素组凋亡指数都明显高于对照组，100mg／kg大黄素组最高(P<0．05)。实验组对比对照组能促进肝癌细胞凋亡，减小肿瘤的体积，延迟肿瘤生长，并呈剂量相关性。4．免疫组化结果显示随着大黄素剂量的不断增加，肿瘤组织中AIF、EndoG蛋白表达逐渐增强，组间两两比较差异均有统计学意义(P

7、荧111光结果显示不同剂量大黄素组肿瘤组织中AIF及EndoG的表达位置发生了明显变化，出现由胞浆向胞核移位的现象；对照组肿瘤组织中AIF、EndoG的表达位置的变化不明显。结论：1．大黄素可以明显抑制SMMC．7721细胞在裸鼠体内的生长，促进肿瘤凋亡；2．经AIF、EndoG介导的非Caspase依赖的线粒体通路诱导细胞凋亡，是大黄素抑制人肝癌SMMC．7721细胞移植瘤生长的机制之一。关键词大黄素，肝癌移植瘤，细胞凋亡，AIF，EndoGABSTRACTBackgroudandobject：Primarylivercan

8、cerisoneofthemostcommonmalignancies．Itisreportedthatabout1millioncasesarediagnosedeachyeararoundtheworld．Withthecharacteristicsofhighmalig