氯喹抑制放射诱导的自噬对食管癌细胞放射敏感性影响的研究

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1、中图分类号：R73,R81,R97硕士学位论文氯喹抑制放射诱导的自噬对食管癌细胞放射敏感性影响的研究院（系）、所临床医学院研究生姓名袁晓丽学科、专业肿瘤学导师姓名李涛教授二Ο一三年五月目录1氯喹抑制放射诱导的自噬对食管癌细胞放射敏感性影响的研究………………………………………………………………11.1中文摘要………………………………………………………11.2英文摘要………………………………………………………41.3前言……………………………………………………………71.4材料与方法…………………………

2、…………………………131.5结果……………………………………………………………301.6讨论……………………………………………………………411.7结论……………………………………………………………471.8参考文献………………………………………………………481.9英汉缩略词对照表……………………………………………552致谢……………………………………………………………563放射诱导肿瘤细胞自噬及其对肿瘤放射效应的影响（综述）…………………………………………………………………57氯喹抑制放射诱导

3、的自噬对食管癌细胞放射敏感性影响的研究摘要目的：本研究探讨氯喹（Chloroquine，CQ）抑制放射诱导的自噬对食管癌TE-1细胞放射敏感性的影响及其主要机制。方法：采用MTT法检测不同浓度CQ对TE-1细胞的生长抑制作用，计算CQ的IC10、IC50，后续试验选取IC10作为CQ作用浓度。实验分不同照射剂量组、不同加药顺序联合照射组，于照射后不同时间，用Western-blot测定TE-1细胞自噬相关蛋白LC3和Beclin-1的表达。用Lyso-TrackerRedDND-99/Hochest

4、33258荧光染色，荧光显微镜观察细胞内酸性囊泡（Acidicvesicleorganelles,AVOs）的变化。Annexin-V/PI双染色法用流式细胞仪（FlowCytometer,FCM）检测细胞经不同处理6h、24h后的早期凋亡率。采用克隆形成分析法测定不同CQ加药顺序对TE-1细胞放射敏感性的影响，并用单击多靶数学-D/DoN2模型[SF=1-(1-e)]和线性二次函数模型[SF=e^(-αD-βD)]拟合剂量-生存曲线，计算出D0、Dq、SF2、放射增敏比（SERD0）和α、β、α/

5、β等放射生物学参数。结果：不同浓度CQ作用于食管癌TE-1细胞48h后，随CQ浓度增加，细胞存活率逐渐减低，呈浓度依赖性。IC10和IC50分别为15.416±3.327μmol/L和72.332±5.277μmol/L。后续实验选择低毒性浓1度15μmol/L作为CQ作用浓度。Western-blot显示，放射线可诱导TE-1细胞自噬相关蛋白Beclin-1和LC3的表达并促进LC3-I转换为LC3-II，在照射后6h达到高峰；荧光染色显示，放射线显著诱导TE-1细胞内酸性囊泡的形成，随照射剂量增

6、加，酸性囊泡体积明显增加，并出现融合，细胞内荧光强度明显增加，在照射后6h和12h变化明显。照射前后加入CQ作用于TE-1细胞后，与单纯照射组（RT）、照射前使用CQ组（Pre-CQ）相比，照射后使用CQ组（Post-CQ）显著下调放射线诱导的自噬相关蛋白Beclin-1的表达和LC3-I向LC3-II转换，照射后6h、12h变化明显，差异具有统计学意义（P<0.05）。同时减小了酸性囊泡体积、细胞内荧光弥散、荧光强度减弱，差异具有统计学意义（P<0.0001）。FCM显示，在照射后24h，随着照射

7、剂量增加，细胞早期凋亡率逐渐增加，差异具有统计学意义（P<0.0001）；而在照射后6h，不同剂量组早期凋亡率差异无统计学意义（P=0.8489）。在照射后24h，照射后使用CQ（2Gy+CQ）组显著增加细胞早期凋亡率，差异具有统计学意义（P<0.05）；而在照射后6h，不同CQ加药顺序联合照射对TE-1细胞早期凋亡率的差异无统计学意义（P>0.05）。克隆形成实验：单纯照射（RT）组D0值为1.9964Gy，Dq值为0.5533Gy，N值为1.8930，SF2值为0.5795，α值为0.1537，

8、β值为0.0491，α/β值为3.1284。照射前使用CQ组（Pre-CQ）D0值为1.9260Gy，Dq值为0.5285Gy，N值为1.8810，SF2值为0.5604，放射增敏比SERD0值为1.0366，α值为0.1605，β值为0.0532，α/β值为3.0688。照射后使2用CQ组（Post-CQ）D0值为1.3872Gy，Dq值为0.2040Gy，N值为1.4030，SF2值为0.3152，放射增敏比SERD0值为1.4392，α值为0.4061，β值为0