资源描述：
《自噬的抑制影响长春新碱诱导的肝癌细胞自噬性凋亡_彭心昭》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、32肿瘤2004年1月25日第24卷第1期TumorJan.2004,Vol.24,No.1基础研究自噬的抑制影响长春新碱诱导的肝癌细胞自噬性凋亡1*22彭心昭陈英朴英杰摘要:目的研究自噬特异性抑制剂3甲基腺嘌呤(3methyladenine,3MA)对长春新碱(vincristine,VCR)诱导的肝癌细胞系HepG2细胞自噬性凋亡的影响。方法利用已建立的VCR诱导HepG2细胞自噬性凋亡之模型,采用monodansylcadaverin(MDC)染色及流式细胞术荧光强度测定方法对自噬进行定量
2、研究,采用流式细胞术及DNA电泳检测细胞凋亡。结果3MA可以特异性地阻止自噬泡形成,还可以部分地抑制HepG2细胞自噬性凋亡。结论自噬是VCR诱导的HepG2细胞自噬性凋亡所必需的。关键词:自吞噬作用/药物作用;凋亡;长春新碱;3甲基腺嘌呤中图分类号:R730.23文献标识码:A文章编号:10007431(2004)01003203*InhibitionofautophagyinfluencestheautophagicapoptosisinducedbyvincristinePE
3、NGXinzhao,CHENYing,PIAOYingjie(DepartmentofOncology,TheNavy421HospitalofPLA,Guangzhou510318,China)Abstract:ObjectiveTostudytheinfluenceof3methyladenine(3MA),aspecialinhibitorofautophagy,ontheautophagicapoptosisinducedbyvincristine(VCR)incelllineHepG2.M
4、ethodsTheautophagicapoptosisinducedbyVCRinHepG2cellswasusedasinvitromodels.Withmeasureofmonodansylcadaverin(MDC)staining,theautophagywasanalyzedquantitatively.ApoptosiswasinvestigatedbyflowcytometryandelectrophoresisofDNA.Results3MAcanspecificallyinhibitt
5、heformationofautophagicvacuolesandcanpartiallypreventtheautophagicapoptosisofHepG2cells.ConclusionAutophagyisneededinHepG2cellsautophagicapoptosisthatwasinducedbyVCR.Keywords:Autophagocytosis/drugeffects;Apoptosis;Vincristine;3methyladenine[2]自噬(aut
6、ophagy)是一个发生在真核细胞中由量;VCR组的药物处理基本同文献之自噬性凋亡细胞内初级溶酶体处理内源性底物的重要过程。根模型制作,即于培养细胞中加入1g/ml的VCR处据作者近年来对细胞自噬与细胞凋亡(apotosis)关理;3MA组只用6mmol/L的3MA处理细胞;3MA[1,2,3]系的研究,认为细胞凋亡中有自噬性凋亡这+VCR组先用6mmol/L的3MA处理细胞,1h后样一种特殊类型,有着明显自噬特征的细胞凋亡则加入浓度为1g/ml的VCR。各组分别于药物处称之为自噬性凋亡(auto
7、phagicapoptosis)。自噬理不同时间后用0.125%胰蛋白酶EDTA消化收获可能与凋亡的调控机制有关。长春新碱(vin细胞或取出细胞爬片,进行以下观察研究。cristine,VCR)是一种常用的抗肿瘤药物,本研究中,1.3MDC荧光染色检测自噬自噬泡(autophagic作者在用VCR诱导HepG2细胞自噬性凋亡的模vacuoles,AV)的染色方法按Biederbick等人的方[3][4]型之基础上,使用了自噬的特异抑制剂3MA,法[5]用monodansylcadaverin(MDC,
8、Sigma公司产以观察3MA对自噬和自噬性凋亡的影响。品)染色来进行:生长于细胞爬片小盖片上的培养细胞用0.05mmol/LMDC于37温育60min后,1材料与方法4%多聚甲醛固定15min,PBS洗两次,使用荧光显1.1细胞培养肝癌细胞系HepG2细胞(购自中微镜(Olympus)加用356nm发射滤片和545nm阻科院上海细胞所)用含10%小牛血清的RPMI1640断滤片进行观察和摄
