自噬抑制剂氯喹刺激ros产生增强人乳腺癌细胞对3溴丙酮酸敏感性

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1、硕士学位论文自噬抑制剂氯喹刺激ROS产生增强人乳腺癌论文题目：细胞对3-溴丙酮酸的敏感性AutophagyblockerchloroquinepromotingformationofROSandenhancingthesensitivityofhumanbreastcancercellsto3-brominepyruvicacid研究生姓名:张倩雯指导教师:蒋志文教授刘浩教授学科专业:药理学研究方向:生化药理论文工作时间:2012年7月至2014年5月学位论文原创性声明本人郑重声明：本人所呈交的学位论文是本人在导师指导下独立进行实验研

2、究工作所取得的成果，本论文中不包含其他人已经发表或已经获取得的研究成果。在本论文撰写中所引用其他研究者的研究内容和成果时已在论文中给予特别标注和明确说明。对本论文的实验研究以及论文撰写过程中给予帮助和建议等贡献的其他人士，也已作了致谢说明。本人完全理解本声明的法律责任，以及所涉及的结果将由本人承担。学位论文作者签名：张倩雯日期：2014年5月20日关于学位论文著作权的共享声明根据《中华人民共和国著作权法》和《高等院校知识产权管理条例》，本学位论文，题目：自噬抑制剂氯喹刺激ROS产生增强人乳腺癌细胞对3-溴丙酮酸的敏感性，是研究生在导师

3、指导下完成的职务作品，得到蚌埠医学院相关部门科室的物质技术和经费支持，因此，本学位论文的著作权由研究生，导师和蚌埠医学院三方共同享有，均享有署名权和使用权等权益；本学位论文成果归属蚌埠医学院。根据国家学位授予条例，学校对本学位论文有使用权，包括保存本学位论文；因教学和科研的目的，保留在图书馆被查阅或借阅；学校可根据国家规定将本学位论文送交国家有部门保留和使用。学校在公布本学位论文的全部或部分内容时，应保障研究生和导师的署名权等权益。研究生和导师在公开发表本学位论文的全部或部分内容时必须保障学校的署名权等权益，即在发表论文时蚌埠医学院及

4、相关部门科室应署名为作者单位。声明人完全理解本声明的法律责任研究生签名：张倩雯导师签名：蒋志文日期：2014年5月20日目录一中文摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„1二英文摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„5三论文正文„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„121.引言„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„122.材料与方法„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„132.1细胞培养152.2MTT法检测细胞存活率152.3集落克隆实验检测对细胞增殖抑制作用162.4Ann

5、exinV/PI双染检测细胞凋亡162.5线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测细胞凋亡172.6激光共聚焦显微镜观察GFP-LC3质粒转染细胞后自噬小体出现182.7免疫印迹法检测相关蛋白的表达182.8细胞内ROS水平检测222.9裸鼠荷瘤实验223.结果„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„233.13-BrPA对人乳腺癌细胞增殖的影响233.23-BrPA诱导人乳腺癌MDA-MB-435和MDA-MB-231细胞发生自24噬3.3抑制自噬增强3-BrPA诱导人乳腺癌MDA-MB-435、MDA-MB-23126细

6、胞死亡的作用3.43-BrPA和CQ联合使用诱导乳腺癌MDA-MB-435细胞发生依赖于RIPK1的凋亡，而诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞发生依赖于RIPK1/3的28坏死性凋亡3.53-BrPA和CQ联合使用诱导乳腺癌MDA-MB-435细胞和30MDA-MB-231细胞死亡是通过刺激细胞内ROS产生的3.6CQ可以增强3-BrPA体内抗肿瘤效果314.讨论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„335.结论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„356.参考文献„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„

7、„„„357.致谢„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„39四附录„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„40附录A英中文术语缩略语对照表„„„„„„„„„„„„„„40附录B主要试剂配制方法„„„„„„„„„„„„„„„„„41附录C个人简历及发表论文„„„„„„„„„„„„„„„„45附录D综述„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„46自噬抑制剂氯喹刺激ROS产生增强人乳腺癌细胞对3-溴丙酮酸的敏感性研究生：张倩雯指导老师：蒋志文教授刘浩教授中文摘要目的：1.探讨3-溴丙酮酸（3-Bromopy

8、ruvate，3-BrPA）对人乳腺癌细胞增殖抑制及诱导凋亡的影响，以及3-BrPA诱导人乳腺癌细胞产生自噬。2.探讨氯喹（Chloroquine，CQ）和3-BrPA联合使用对人乳腺癌细胞增殖抑制及诱导细胞死亡的影响，