rna干扰抑制rpa70表达对食管癌细胞放射敏感性影响的体外实验研究

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1、徐州医学院硕士学位论文RNA干扰抑制RPA70表达对食管癌细胞放射敏感性影响的体外实验研究姓名：王洵申请学位级别：硕士专业：肿瘤学指导教师：顾玉明2012-05徐州医学院硕士学位论文RNA干扰抑制砌陵70表达对食管癌细胞放射敏感性影响的体外实验研究中文摘要目的观察砌)A70的mIⅢA及其蛋白在食管癌TE．1细胞中的表达情况；观察m)A70基因特异性反义寡核苷酸(AS．砒)A．70)对食管癌TE．1细胞中RPA70的mRNA及其蛋白表达的影响；探讨特异性阻断对狻70基因表达后联合不同剂量的X线照射对食管癌TE．1细胞增殖、凋亡的影响。方法使用食管癌TE．1

2、细胞株，利用RT-PCR和免疫组化法分别检测该细胞中Ⅺ狻70的mRNA及其蛋白的表达情况；使用脂质体2000介导，采用瞬时转染法转染砒)A70特异性反义寡核苷酸(AS．对)A．70)及阴性对照寡核苷酸于食管癌TE．1细胞中，设实验组(砌)A70基因特异性反义寡核苷酸)、阴性对照组(阴性对照寡核苷酸)、Mock组(加入转染试剂脂质体2000)及空白对照组(只加入无血清培养基Opti．MEM)，在24、48、72、96小时四个转染时间点进行观察：使用ImPCR、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和WeStemBlot法分别检测各组、各时间段食管癌TE．1细

3、胞中尉)A70的mRNA及其蛋白的表达情况；用CCK．8法、流式细胞仪分别检测AS．Ⅺ'A．70转染后96h联合辐射对食管癌TE．1细胞增殖和凋亡的影响。结果Ⅺ狻70的mRNA及其蛋白在食管癌TE．1细胞中均有表达；RT-PCR、qImPCR法结果表明实验组转染后砒後70的mI矾A含量在72h达到最低，Wbstemblot法结果表明实验组转染后雕)A70的蛋白表达在96h达到最低，其他各对照组转染后刚)A70的mRNA及其蛋白含量无明显改变；细胞增殖及凋亡分析结果示AS．砌)A．70转染后96h联合放射可明显抑制食管癌TE．1细胞的增殖、诱导其凋亡，实验

4、组的细胞抑制率和凋亡率明显高于各对照组。(P

5、ractObjectiVeToobservemeexpressionof砌)A70mRNAandproteininesophageaJcarcinomaTE-1cell；ToobserVetheinnuenceofRPA70gene．specific觚tisenseoligonucleotides(AS-RPA一70)tot11e船～70mRNAandproteinexpressioninesophagealcarCinomaTE·1cell；ToinVestigate恤pr01iferationandapoptosisoftheSpeci6cinlli

6、bitorofRPA70geneexpressioncombinedwimdi伍玳mdosesofX—rayirradiationt0esophagealcarcinomaTE一1cell．MethodsImPCRa11dimmunohistochemist巧w(粕usedtodetectthet11e砌)A70mRNAa11dproteinexpressioninesophagealcarcinomaTB·1cell．AntisenseoligonuleotidesofRFIA70，mediatedbyLipofectamineTlⅥ2000，、ver

7、etransfectedtoesophagealcarcinomaTE-1cell．Fourgroupswerestudied：锄tisensetraIlsfectedgroup，negativecontrol，mockgroup(onlyLipofect锄ineTM2000)，blankcon臼的lgroupand24h、48h、72h、96hfourtransfectiontimeslots．ExpressionlevelsofRPA70mIⅢAinTE-lofeachgroupsweredetenllinedbyR1、．PCRaIldquantit

8、ativerealtimePCR(qR-T-PCIU，R】)A70protein