KPT-330对食管癌细胞放射敏感性的影响及其作用机制

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1、分类号：R735.1单位代码：10159密级：公开学号：201520295硕士学位论文中文题目：KPT-330对食管癌细胞放射敏感性的影响及其作用机制英文题目：TheimpactofKPT-330onradiosensitivityofEsophagealsquamouscancercellsanditsmechanism论文作者：徐晶指导教师：李光教授学科专业：肿瘤学完成时间：2018年2月中国医科大学硕士学位论文KPT-330对食管癌细胞放射敏感性的影响及其作用机制TheimpactofKPT-330onradiosensitivityofEsoph

2、agealsquamouscancercellsanditsmechanism论文作者徐晶指导教师李光教授申请学位医学硕士培养单位第一临床学院一级学科临床医学二级学科肿瘤学研究方向食管癌放射治疗增敏与放射生物学论文起止时间2016年12月—2018年2月论文完成时间2018年2月中国医科大学（辽宁）2018年2月I中国医科大学硕士学位论文摘要目的：根治性放化疗目前已成为中晚期食管癌的主要治疗手段，然而由于存在放疗抵抗性，食管癌的总体生存率仍很低。核输出蛋白1（exportin1）又叫染色体区域稳定蛋白1(chromosomeregionmaintenan

3、ce1,CRM1)，在食管癌中表达增高，其表达水平与食管癌放射治疗预后不良相关。目前已经在直肠癌细胞和非小细胞肺癌细胞中研究证明了抑制CRM1增加了细胞放射敏感性，而抑制CRM1能否增加食管癌细胞的放射敏感性目前尚未见报道。KPT-330是CRM1选择性核输出抑制剂，目前已在非霍奇金淋巴瘤、急性髓系白血病等多种恶性肿瘤中开展了Ⅰ/Ⅱ期临床试验，研究结果表明KPT-330具有安全的抗肿瘤作用。本研究首次在食管癌细胞系ECA109中将KPT-330和放射治疗联合应用，探究KPT-330是否增加了食管癌细胞的放射敏感性及其作用机制。研究方法：采用MTT实验检测

4、ECA109细胞经梯度浓度KPT-330（0、0.01、0.05、0.1、0.5、1、10、50umol/L）处理后72h的细胞活性变化并计算其半数抑制浓度(IC50)；通过集落克隆形成实验检测ECA109细胞经0.1umol/L浓度的KPT-330处理12h后接受梯度照射剂量(0、2、4、6、8Gy)后对ECA109细胞生存分数的影响；为了探究其放射增敏机制，我们将ECA109细胞分为对照组、KPT-330单药组、单独照射组（IR组），照射联合KPT-330组（IR+KPT-330组）：ECA109细胞接受KPT-330（0、0.1、0.3umol/L

5、）处理12h后接受0或4Gy照射后24h，采用WesternBlot方法检测CRM1、p53蛋白表达水平变化及p53蛋白核内外分布变化；ECA109细胞经KPT-330处理12h后给予0或4Gy照射后48h，流式细胞术检测以上各组细胞凋亡分数；ECA109细胞经KPT-330处理12h后接受0或4Gy照射后24h，流式细胞术检测以上各组细胞周期分布变化。结果：1、MTT实验：ECA109细胞经梯度浓度KPT-330处理72h后的IC50为0.9umol/L，且细胞活性随KPT-330浓度递增而逐渐下降。2、集落克隆形成实验结果表明0.1umol/L浓度的

6、KPT-330联合放射治疗明显降低了食管癌ECA109细胞的增殖能力；在ECA109细胞中IR组和IR+KPT-330组的平均致死剂量D0值分别是3.36和1.65，细胞2Gy生存分数(survivalfractionof2Gy，SF2)分别为56.71%和44.89%，0.1umol/L浓度的KPT-330对ECA109细胞的放射增敏比（sensitizationenhancementratio，SER）是2.04。3、细胞凋亡实验结果分析表明，0.1umol/L浓度III中国医科大学硕士学位论文的KPT-330没有增加ECA109食管癌细胞凋亡率（P

7、>0.05），提示0.1umol/L浓度的KPT-330对ECA109细胞没有药物毒性，而IR+KPT-330组与IR组比较KPT-330增加了射线诱导的ECA109细胞凋亡，且具有药物浓度依赖性，0.3umol/L浓度的KPT330联合照射组细胞凋亡更加明显，差异具有统计学意义（P<0.05）。4、细胞周期结果分析显示，KPT-330单药组（0.1、0.3umol/L）与对照组相比较增加了ECA109细胞G2/M期阻滞，差异具有统计学意义（P<0.05，P<0.05）；与IR组比较，IR+KPT-330组明显增加了射线介导的ECA109细胞G2/M期阻

8、滞，差异具有统计学意义（P<0.01，P<0.01）。5、WesternBlot