氧糖剥夺再灌注后高尔基体的形态变化及其可能机制的探讨

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1、中图分类号UDC博士学位论文学校代码密级10533氧糖剥夺再灌注后高尔基体的形态变化及其可能机制的探讨TheFragmentationofGolgiApparatusARerOxygen—91ucoseDepriVationFoUowedByReper如sionandItsUnderlyingMechanism作者姓名：莫晓叶学科专业：临床医学研究方向：神经病学学院(系、所)：湘雅二医院指导教师：胡治平教授论文答辩日期上型羔翻答辩委员会主席挝．一：中南大学二O一三年五月原创性声明嘲删删㈣嗍嘲m删㈣ⅢlY2423455本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的

2、研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者躲斗日期．丝年三月塑日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会

3、公众提供信息服务。日期：望噍年互月卫日中文摘要氧糖剥夺再灌注后高尔基体的形态变化及其可能机制的探讨第一章氧糖剥脱再灌注后高尔基体的形态变化目的：探讨氧糖剥脱再灌注后高尔基体的形态变化以及其结构蛋白GMl30的表达。方法：以小鼠神经瘤母细胞株N2a细胞为研究对象，经历氧糖剥夺再灌注过程后，采用CCK．8法检测细胞活力，T切怔L荧光染色法评估细胞凋亡，并应用免疫细胞化学方法观察高尔基体的形态变化，应用Wrestemblot技术检测GMl30和磷酸化GMl30(phospho—GMl30)的蛋白表达。结果：1．CCK_8法显示，氧糖剥夺后再灌注6小时、12小时、24小时和48小时，细胞活

4、力均明显降低，与正常组之间比较，具有显著性统计学差异(P<0．05)；2．n腿L荧光染色结果显示，与正常组相比，氧糖剥夺4小时和再灌注6小时的凋亡细胞比率较少(P>O．05)，而再灌注12小时、24小时和48小时的凋亡细胞比率逐渐增高(P

5、6小时、12小时、24小时的总GMl30蛋白表达水平无明显改变(P>O．05)，再灌注48小时，细胞内总GMl30的蛋白表达出现下降，差异具有统计学意义(P>O．05)；而正常组、氧糖剥夺4小时组以及再灌注6小时组细胞内phospho—GMl30基本不表达，再灌注12小时组有少量表达(P>O．05)，再灌注24小时和48小时，细胞内phospho．GMl30的表达明显增多，与正常组相比，差异具有统计学意义(P

6、灌注后高尔基体形态的影响目的：Cdl(1抑制剂抑制GMl30的磷酸化，探讨氧糖剥夺再灌注后GMl30磷酸化对高尔基体形态的影响。方法：以N2a为对象，经历氧糖剥夺再灌注后，应用W．estemblot和RealtimePCR技术检测各时间点Cdkl的蛋白和mRNA变化；Cdkl抑制剂PurvalanolA干预细胞后，经氧糖剥夺再灌注，CCK．8法检测III细胞活力，免疫细胞化学技术观察高尔基体的形态改变，免疫荧光共聚焦研究GMl30和phospho．GMl30在细胞内的定位和表达，W．eStemblot技术检测PurvalanolA干预后各组Cdkl、GMl30和phospho—GM

7、l30的蛋白表达。结果：1．经历氧糖剥夺再灌注后，W．estemblot结果提示，再灌注12小时、24小时、48小时后，Cdl(1的蛋白表达明显增高(P