17β-雌二醇对氧糖剥夺再灌注损伤的pc12神经细胞的保护作用

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1、170-雌二醇对氧糖剥夺再灌注损伤的PC12神经细胞的保护作用李东峰1高虹1周文科2（1南阳市屮心医院河南南阳473000;2新乡医学院第一附属医院河南卫辉453100）【屮图分类号】R969【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）49-0037-02【摘要】目的研究17β-雌二醇对氧糖剥夺再灌注损伤的PC12祌经细胞的作用。方法将PC12神经细胞随机分为三组：正常对照组；OGD-R（oxygen-glucosedeprivationandreperfusion）组和17β-E2（17β■雌二醇）治疗组。OGD-R

2、组和17β-E2治疗组进行氧糖剥夺再灌注，观察氧糖剥夺后PC12神经细胞形态改变；流式细胞仪检测再灌注24h后PC12神经细胞早期凋亡率和死亡率。数据以均数±标准差（x-±s）表示，应用SPSS13.0软件包进行统计学分析，显著性水准为α=0.05。结果（1）氧糖剥夺30min后17β-E2治疗组较OGD-R模型组PC12神经细胞胞体水肿轻，保留丫突起，但较正常细胞明显变短其至消失。（2）流式细胞仪检测示再灌注24小时后早期凋亡率和死亡率屮17β-E2治疗组均介于正常对照组和OGD-R组之间，

3、三组间两两比较均有显著性统计学差异。结论17β-雌二醇对氧糖剥夺再灌注损伤的PC12神经细胞有保护作用。【关键词】雌激素PC12细胞神经元氧糖剥夺NGF流行病学调查发现，绝经前女性的脑卒屮的发病率明显低于男性，但绝经后其发生率达到男性的发病率，使人们认识到雌激素可能有神经保护作用。目前已经进行丫大量的动物实验和临床研究显示：外源性17β-雌二醇可明显减轻脑损伤后的脑水肿，促进认知功能的恢复，抑制迟发性神经元死亡。A前这些研究仅建立在动物模型上，受到脑内胶质细胞、炎症细胞等因素影响较人，研究结果存在很大争议。本实验采用国内外经典的模拟体内缺血再

4、灌注的细胞氧糖剥夺再灌注损伤模型［1］，以PC12神经细胞为对象研究雌激素对神经细胞的作用。1材料和方法1.1主要试剂和仪器PC12细胞（上海中科院典型细胞培养库）;NerveGrowthFactor（NGF2.5S）（美国Invitrogen公司）；倒置显微镜（日本Nikon公司）；细胞缺氧装置（自制）；17β-雌二醇（美国Sigma公司）；DMEM培养基（无糖，无酸红）（美国Sigma公司）；ArwexinV-FITC细胞凋亡检测试剂盒（碧云天生物技术研究所）。1.2试验方法1.2.1PC12细胞的培养传代PC12细胞用高糖DMEM培养基在37°C

5、5%C02及饱和湿度的条件下培养。培养3〜5天后传代。以l×106个细胞/ml的密度进行传代培养，即为PC12细胞2代。1.2.2NGF对PC12细胞的诱导分化［2］用含50ng/mlNGF（2.5s）的预热高糖DMEM培养基对l×106个细胞/mlPC12细胞进行传代培养5天，胞体变成梭形，两极长出较长的突起，呈神经元特征称为PC12神经细胞，按实验需要密度将PC12神经细胞接种于培养板中，再诱导分化48h,选取PC12神经细胞贴壁良好，诱导分化一致的培养孔进行随机分组。1.2.3实验分组及处理实验分组及试验过程处理如下表。实验分组氧糖

6、剥夺期（30min）再灌注期（24h）正常对照组更换为高糖DMEM培养基，不放入缺氧仓进行缺氧。更换为高糖DMEM培养基培养。OGD-R模型组更换无糖DMEM培养基，放入缺氧仓进行缺氧。更换为高糖DMEM培养基培养。17β-E2治疗组更换10nmol/L17β-E2无糖DMEM培养基，放入缺氧仓进行缺氧。更换为10nmol/L17β-E2高糖DMEM培养基培养。1.2.4PC12神经细胞氧糖剥夺再灌注[3]OGD-R组和17β-E2治疗组在氧糖剥夺期分别更换为预热的无糖DMEM培养基和10nmol/L17β-E2

7、无糖DMEM培养基，去培养板盖，放入自制密闭的温度保持在(37±0.5fC的从入U持续充入缺氧混合气体(含95%N2,5%CO2),出口接入水密封瓶的3升缺氧仓中进行缺氧处理。缺氧气体由缺氧仓顶部进入，由底部排出，初以lOL/min,6min后缺氧仓内02浓度降至1%以下，再以lL/min持续充入缺氧混合气体，并开始计吋缺氧30min，取出培养板，分别更换为预热的高糖DMEM培养基和10nmol/L17β-E2高糖DMEM培养基，转移到细胞培养箱内培养。根据实验设计检测以下试验指标。1.2.5观察氧糖剥夺30min后PC12神经细胞的形态

8、将以106个细胞/ml接