枸杞多糖对海马神经元氧糖剥夺再灌注损伤的保护作用及对tlr4nf-κb信号通路的影响

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1、分类号：R9单位代码：10752密级：公开学号：201200163宁夏医科大学硕士研究生学位论文枸杞多糖对海马神经元氧糖剥夺再灌注损伤的保护作用及对TLR4/NF-кB信号通路的影响MechanismofLyciumbarbarumpolysaccharidesonprimaryculturedrathippocampalneurons:possibleinvolvementoftoll-likereceptor4andnuclearfactorkappaBpathway学位申请人：马宁田指导教师：余建强(教授)合作指导教师：申请

2、学位门类级别：医学专业名称：药理学研究方向：神经药理学所在学院：药学院论文完成日期：二○一五年三月宁夏医科大学研究生院NingxiaMedicalUniversityThesisforApplicationofMaster’sDegreeMechanismofLyciumbarbarumpolysaccharidesonprimaryculturedrathippocampalneurons:possibleinvolvementoftoll-likereceptor4andnuclearfactorkappaBpathwaySt

3、udent’sName:MaNingtianSupervisor:YuJianqiangProfessorAssistantsupervisor:SubjectCategory:MedicineMajor:PharmacologySpecialty:NeuropharmacologySchool:CollegeofPharmacyCompletionDate:Mar.2015宁夏医科大学硕士研究生学位论文中文摘要I宁夏医科大学硕士研究生学位论文中文摘要枸杞多糖对海马神经元氧糖剥夺再灌注损伤的保护作用及对TLR4/NF-кB信号通路

4、的影响目的观察枸杞多糖(lyciumbarbarumpolysaccharide,LBP)对原代培养的新生大鼠海马神经元氧糖剥夺再灌注损伤的保护作用，并探讨其作用机制与抗炎的关系。方法1.以原代培养的新生大鼠海马神经元为研究对象，用无糖培养液结合物理性缺氧建立氧糖剥夺再灌注损伤模型，进行下面实验。2.MTT酶反应法检测海马神经元存活率，化学比色法检测神经细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出率。3.应用Hoechst33342染色法、TUNEL法检测原代培养的新生大鼠海马神经细胞凋亡率。4.使用激光共聚焦技术测定海马神经元内游离的钙离子含量

5、以及线粒体膜电位（Mitochondrialmembranepotential，MMP）水平的变化。5.免疫蛋白印迹技术和实时荧光定量PCR技术检测相关因子TLR4，NF-κB，IL-6和IκB-α的蛋白和mRNA的表达。结果1.与正常组比较，氧糖剥夺再灌注损伤组可显著降低神经元的存活率(P<0.01)，提高乳酸脱氢酶的漏出率(P<0.01)；与损伤组比较，枸杞多糖治疗组(10、20、40mg/L)可显著提高海马神经细胞的存活率(P<0.01)，降低乳酸脱氢酶的漏出率(P<0.01)。2.与正常组比较,Hoechst33342和T

6、UNEL法检测显示氧糖剥夺再灌注损伤组神经细胞凋亡率明显升高(P<0.01)；与损伤组比较，枸杞多糖治疗组(10、20、40mg/L)可显著降低神经细胞的凋亡率(P<0.01，P<0.05)。3.与正常组比较，氧糖剥夺再灌注损伤组可显著提高海马神经元的游离钙离子的含量(P<0.01)，降低线粒体膜电位的荧光值(P<0.01)；与损伤组比较，枸杞多糖剂量组(10、20、40mg/L)可显著降低海马神经元内游离钙离子的含量(P<0.05，P<0.01)，稳定线粒体膜电位(P<0.01)。4.与正常组比较，氧糖剥夺再灌注损伤组中大鼠海马

7、神经细胞NF-κB、IL-6和TLR4的蛋白水平明显上调(P<0.01)(P<0.01)(P<0.01)，而IκB-α蛋白水平明显下调II宁夏医科大学硕士研究生学位论文中文摘要(P<0.01)，有显著性差异；与损伤组比较，枸杞多糖治疗组(40mg/L)可明显抑NF-κB、IL-6和TLR4蛋白表达(P<0.05)(P<0.05)(P<0.05)，增强IκB-α蛋白的表达(P<0.01)。5.与正常组比较，氧糖剥夺再灌注损伤组中大鼠海马神经元的NF-κB、IL-6和TLR4mRNA水平明显上调(P<0.01)(P<0.01)(P<0

8、.01)，IκB-α基因表达水平明显下调(P<0.01)，有显著性差异；与损伤组比较，枸杞多糖治疗组(40mg/L)可明显抑制NF-κB、IL-6和TLR4mRNA表达(P<0.01)(P<0.05)(P<0.01)，增强IκB-α蛋白的表达(P<