核纤层蛋白的生物信息分析及下调lmna对斑马鱼体内rag-1基因表达影响的初步研究

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1、《中国图书资料分类法》分类号：R725.5单位代码：10660学号：S100156贵阳医学院2013届硕士学位论文核纤层蛋白的生物信息分析及下调lmna对斑马鱼体内rag-1基因表达影响的初步研究研究生：黄惠敏导师：何志旭教授栾佐教授年级：2010级专业：儿科学2013年5月20日贵阳医学院2013届硕士研究生论文目录摘要.....................................................1前言.....................................................3材料与方法.......

2、........................................6结果...................................................26讨论....................................................40结论....................................................47参考文献................................................48英文摘要..................

3、..............................53致谢...................................................55主要英文缩略词..........................................56学位论文独创性声明......................................57附：综述................................................58贵阳医学院2013届硕士研究生论文核纤层蛋白的生物信息分析及下调lmna对斑马鱼*体内

4、rag-1基因表达影响的初步研究专业名称：儿科学研究生：黄惠敏导师：何志旭教授栾佐教授摘要目的：利用斑马鱼作为模式生物，进行lmna基因的生物信息分析，并利用morpholino逆向遗传学技术下调lmna基因，研究斑马鱼lmna基因下调后淋系转录调控因子rag-1的表达情况，以初步探讨lmna基因对淋系造血发育的影响。方法：采用进化树、蛋白质序列比对及共线性分析方法进行斑马鱼lmna基因的生物信息分析。利用westernblot检测斑马鱼体内LMNA蛋白的表达。利用lmna-2+2+2+pCS（full-length）和EGFP-pCS质粒构建lmna-EGFP

5、-pCS质粒，通过测序鉴定验证质粒克隆成功。将质粒显微注射于胚胎中，荧光显微镜下观察绿色荧光。将质粒与lmna-morpholino共注射，观察绿色荧光蛋白的表达。若绿色荧光下降或消失，即lmna-morpholino能有效下调lmna基因，建立lmna基因下调的表型。将lmna-morpholino注射组作为实验组，control-morpholino注射组作为实验对照组，显微注射后收集相应时相的胚胎，通过原位杂交及实时荧光定量PCR方法观察淋系转录调控因子rag-1基因的表达情况，研究lmna基因下调后，对淋系转录调控因子rag-1的影响。结果：生物信息分析

6、结果提示斑马鱼的lmna、lmnb1和lmnb2基因是人类lmna、lmnb1和lmnb2基因的直向同源物。Westernblot法成功检测斑马鱼体内LMNA蛋白的表达，第一个条带大小为69KD，第二个条带大小为62KD。在基因水平上验证lmna-morpholino能有效下调lmna基因，即2+同时注射lmna-EGFP-pCS质粒和lmna-morpholino后，荧光显微镜下观察绿色荧光消失。原位杂交及实时荧光定量PCR方法结果提示，rag-1基因在实验组中表达有下降。结论：1.斑马鱼的核纤层蛋白与人类的相似程度高，具有直向同源性，提示基因在进化过程中高度

7、保守。2.斑马鱼体内可检测到lmna基因编2+码的蛋白质的表达。3.构建lmna-EGFP-pCS质粒用于检测lmna-morpholino效能测定。4.利用morpholino逆向遗传学技术成功建立斑马鱼lmna基因下调的表型。5.斑马鱼体内lmna下调，rag-1基因表达量下降。*本课题受国家自然科学基金资助（31260284）1贵阳医学院2013届硕士研究生论文关键词：斑马鱼lmna基因morpholinorag-1基因2贵阳医学院2013届硕士研究生论文前言核纤层（nuclearlamina）是位于细胞核内染色质与核膜之间的网状结构，主要由核纤层蛋白和核

8、纤层结合膜蛋白组成。核纤