胚胎期铅暴露对斑马鱼nmda受体表达及行为的影响

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1、温州医学院硕士学位论文胚胎期铅暴露对斑马鱼NMDA受体表达及行为的影响姓名：张小晶申请学位级别：硕士专业：中药学指导教师：郭小娟；黄陈平2012-05-21温州医学院硕士学位论文胚胎期铅暴露对斑马鱼NMDA受体表达及行为的影响摘要铅是常见的环境污染物，目前认为胚胎发育阶段铅暴露是导致后期神经行为发育障碍的重要因素，但其机制尚不清楚。本文选择模式生物斑马鱼建立胚胎铅暴毒模型，开展了如下研究：①铅对斑马鱼胚胎发育的毒作用；②铅对斑马鱼胚胎及幼鱼NMDA受体表达的影响；③胚胎期铅暴露对斑马鱼行为的影响。实验

2、一，野生型AB品系斑马鱼胚胎自受精后lh(1hpf)起分别用醋酸铅质量浓度为O．1、O．5、2．5、12．51nnol／L胚胎培养液染毒至胚胎孵出或死亡，每组胚胎50枚，相差显微镜观察胚胎发育全程并记录毒性反应，于4、8、16、24、48、72hpf进行胚胎活体拍摄，以不含铅培养液孵养的胚胎作为对照。另取各组36hpf胚胎，电镜观察间脑神经细胞超微结构。结果显示：铅暴露组胚胎死亡率明显升高(P

3、露胚胎发育异常主要见于胚胎发育早期，多表现为胚胎发育迟缓；铅暴露胚胎在发育过程中出现少数畸形，但无统计学意义；除12．5I_maol／L铅暴露组外，其它铅暴露组胚胎的平均孵出时间较对照组滞后(尸

4、72、96和120hpf斑马鱼胚胎或幼鱼总RNA，实时定量PCR技术检测斑马鱼NMDA受体亚基NRl．1、NRl．2、NR2B在以上时间点的mRNA表达量。结果显示：(1)对照组NRl．1、NRl．2及NR2B表达量在胚胎发育过程中逐渐升高，在孵化期(72hpf)表达量增加明显，在幼鱼早期(96hpf)时达到高峰(与24hpf时比较，P<0．01)，在120hpf时仍处于较高水平。(2)随着铅暴露浓度增高，NRl．1表达量增加并有高峰前移的趋势，2．5lmaol／L和12．5VmoFL铅暴露组NRl．

5、1表达高峰期在72hpf’并且显著高于对照组(尺O．05)；铅暴露组NRl．2、NR2B动态表达也呈类似规律，但NRl．2表达高峰期呈平台化趋势，横跨72hpf至120hpf阶段，NR2B表达高峰期出现在72hpf和120hpf阶段。(3)NRl．1、NRl．2及NR2B基因mRNA表达量之间Pearson相关系数值分别为rl^．m=0．681、rl^∞=0．637和厂，啪=0．514，均有统计学意义(P

6、水平逐渐升高，在幼鱼早期达到高峰。(2)胚胎和幼鱼阶段NRl．1、NRl．2及NR2B之间mRNA表达水平存在温州医学院硕士学位论文关联。(3)铅有上调NRl．1、NRl．2和NR2B基因表达作用，改变了正常的NMDA受体表达规律，其可能与铅的神经发育毒性有关。实验三，斑马鱼胚胎期铅暴露浓度分别为O、0．1、O．5、2．5和12．51maol／L，观察各组24hpf斑马鱼胚胎的自主运动，分析测试120hpf幼鱼对光周期的刺激反应。结果显示：与对照组比较，较低浓度铅暴露组(O．1“mol／L和0．51a

7、mol／L)胚胎单位时间自主运动次数增多，而高浓度铅暴露组(12．51amol／L)则减少，多组之间差异有统计学意义(P

8、能影响其后期行为的发育，推测发育早期铅暴露可能使神经系统兴奋抑制发生改变，低浓度铅暴露能提高神经系统的易化性，而高浓度铅暴露因损害加重而呈现抑制为主。关键词：铅；斑马鱼；毒性；胚胎；NMDA受体；行为4温州医学院硕士学位论文EffectsonexpressionofNMDAreceptorandbehaviorinzebrafishexposedtoleadduringembryonicperiodAbstractLeadWaSoneofthemostc