铅暴露对斑马鱼胚胎mir-9、mir-219及dicer时序性表达的影响

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1、万方数据温州医科大学硕士学位论文论文题目：铅墨重挝斑里鱼胚胎丝堡：21丝堡：2』窆盈望堑丛万方数据lIIIIIIIIIIUllUIY2914371目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．10第一部分斑马鱼胚胎发育过程miR一9、miR．219及Dicer时序性表达材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．131．材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．131．1斑马鱼胚胎收集和孵养⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．131．2试剂及仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一132．方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．142．1总RNA提取⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．142．2cDNA合成⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯152．3荧光定量PCR测定miR一9、miR一219及Dicer表达量2．4统计分析方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．18结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．181．斑马鱼胚胎总RNA琼脂糖凝胶电泳结果⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯．．181．1斑马鱼胚胎总RNA电泳结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯181．2荧光定量PCR扩增产物电泳结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．192．茎环法RT-PCR产物测序结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．19万方数据温州医科大学硕士学位论文3．荧光定量PCR熔点曲线结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯204．胚胎发育过程miR．9、miR．219及Dicer基因表达结果⋯20分析和讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．25一J、结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．26第二部分铅暴露对斑马鱼胚胎miR一9、miR

4、．219及Dicer时序性表达的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．271．材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．271．1实验动物⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．271．2试剂及仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．272．方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯282．1斑马鱼胚胎铅染毒⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．282．2铅染毒斑马鱼胚胎发育形态和毒性反应观察⋯⋯⋯．282．3总

5、RNA提取及eDNA合成⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯282．4荧光定量PCR测定miR．9、miR一219及Dicer表达量．．．⋯．．．⋯．．．．．．．．．．．．．．．．⋯．．．．．．．．．．．⋯．．⋯．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．⋯．⋯．．：!{；2．4统计分析方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．29结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．291．斑马鱼胚胎发育形态观察⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．292．铅暴露斑马鱼胚胎miR．9、miR．219及D

6、icer表达水平⋯312．1铅暴露斑马鱼胚胎miR一9表达水平⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．312．2铅暴露斑马鱼胚胎miR．219表达水平⋯⋯⋯⋯⋯⋯．332万方数据温州医科大学硕士学位论文2．3铅暴露斑马鱼胚胎Dicer表达水平⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．35分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．36，J、结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．38参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯39附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

7、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．42综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．43学位论文独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．49关于学位论文使用授权声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．49万方数据温州医科大学硕士学位论文英文缩略词中英文对照表缩略语英文全称中文名称miRNAmicroRNA成熟的小分子干扰RNAEMEmbryomedium胚胎培养液hpfHourspostfertilization受精后小时数DEPCDiethypyrocarbonate焦炭酸

8、二乙酯Tris(hydroxymethyl)aminomethane—三羟甲基氨基甲烷．乙酸．TAEAceticacid．EDTABu仃er乙二胺四乙酸缓冲液EBEthidiumbromide溴化乙锭PCRPolymerasechainreaction聚合酶链式反应Fluorescentq