斑马鱼低氧应答基因tgf-β1的表达特征及功能分析

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1、⑧一MASTER⋯'STHE螂分类号——UDC密级——编号——誓·尹沸筘方零硕士学位论文学位申请人姓名：侯少圭申请学位学生类别：全日盥硕士申请学位学科专业：建篮鲎指导教师姓名：鲑雪蔓⑨⋯MASTER⋯'STHE哪硕士学位论文fIIIIIIIIIIIIPIIIIIrlIlUIllIIIY2556773斑马鱼低氧应答基因rGF-fll的表达特征及功能分析论文作者：侯少丰指导教师：钟雪萍副教授学科专业：遗传学研究方向：分子遗传学华中师范大学生命科学学院2014年4月⑨硕士学位论文MASTER’STHESISExpressionCharacterizationandFunc

2、tionalAnalofHypoxiaResponsiveGeneInZebrafishAThesisSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementFortheM．s．DegreeinGeneticsByShaofengHouPostgraduateProgramSchoolofLifeScienceCentralChinaNormalUniversitySupervisor：XuepingZhongAcademicTitle：AssociateProfessorII跳naturoApproved刁I／Apr,2014⑨硕

3、士学位论文MASTER’STHESIS华中师范大学学位论文原创性声明和使用授权说明原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下，独立进行研究工作所取得的研究成果。除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人承担。作者签名：／『瑟冲日期：伽件年箩月“日学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解华中师范大学有关保留、使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属华中师范大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构

4、送交论文的复印件和电子版，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以允许采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后遵守此规定)保密论文注释：本学位论文属于保密，在——年解密后适用本授权书。非保密论文注释：本学位论文不属于保密范围，适用本授权书。储签名：／f幼爷孙签名：烨啤日期：秒忡牟歹月矽日日期：加形掣r月J彳El本人已经认真阅读“CALIS高校学位论文全文数据库发布章程”，同意将本人的学位论文提交“CALIS高校学位论文全文数据库”中全文发布，并可按“章程”中的规定享受相关权益。回意诠塞堡童卮进卮!旦坐生；旦

5、二生；旦三生筮查!作者签名：／f天夕}日期：访l下年芦囊“日III糊始乡拗导师签名：夕叮i∥彳日期：沙炒年‘，月／7沪⑧硕士学位论文MASTER’STHESIS摘要低氧现象是池塘、水库、湖泊及近海季节性发生的一种自然现象。近年来，水体富营养化致使低氧现象频繁发生，水体低氧问题已成为制约水产养殖可持续发展的主要因素之一。因此，开展鱼类耐低氧分子机制研究具有重要的理论意义和实践价值。转化生长因子一p1(TGF．p1)是一种多功能细胞因子，参与调节多种细胞活动，具有重要的生物学功能。在前期实验中，我们利用抑制消减杂交技术从鲫鱼囊胚细胞中筛选到低氧应答基因TGF-fll。在

6、此基础上，本研究利用斑马鱼活体实验体系，初步研究了TGF-fll基因的表达特征及其在低氧适应中的功能。取得的主要结果如下i本研究通i立．NCBI获得斑马鱼TGF-fll基因eDNA序列。斑马鱼TGF-flleDNA全长1571bp，编码377个氨基酸。系统进化树分析发现，TGF．p蛋白按照不同的类型严格聚类，斑马鱼TGF．131与其他鱼类的TGF．131聚集到一个分支，在进化中非常保守。在斑马鱼胚胎发育过程中，IH．PCR和Real．TimePCR结果显示TGF-／31基因为母源表达基因，在分节期之前的表达水平比较低，从咽囊期开始持续高水平表达。胚胎整体原位杂交发现

7、，TGF-／31基因在斑马鱼24hpf胚胎中开始有特异信号出现。TGF-fll基因的表达主要分布在腮弓、侧线原基、耳囊、嗅觉基板、心脏和前肾等处。这些结果表NTGF-fll基因可能参与斑马鱼胚胎的免疫调节、循环系统发育和侧线形成。用低氧处理斑马鱼胚胎，发现低氧处理24／J,时后斑马鱼胚胎发育延迟。利用Real．TimePCR和原位杂交检测发现，低氧处理后发育延迟的斑马鱼胚胎中TGF-fllmRNA表达水平较常氧组显著降低。RT-PCR和Real．TimeRT-PCR结果显示，TGF-fll基因在斑马鱼健康成鱼各个组织器官中广泛表达。TGF-fll的mRNA水平在