斑马鱼繁殖生物学与α2ml基因表达型式初步研究

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1、分类号：Q132.4密级：公开udc:591.3学号：2111201106广糸海洋太嗲硕士学位论文斑马鱼繁殖生物学与U2ML基因表达型式初步研究周志诚指导教师：申玉春教授申请学位类别：理学硕士专业名称:海洋生物学研究方向：海洋环境与生物资源保护学院名称：水产学院中国•湛江2015年6月營往铪式答辑奏A会锒成广东海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全

2、意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：•年左月

3、月>日斑马鱼繁殖生物学与α2ML基因表达型式初步研究摘要本研究主要探讨野生型斑马鱼雌雄形态特征、黑色素抑

4、制剂对斑马鱼胚胎发育和黑色素形成的影响以及先天性免疫相关基因α2ML的表达。主要研究结果如下：（1）运用统计学方法建立雌雄斑马鱼鉴别方程：雌：S1=335.868X1+206.572X2-48.174雄：S2=388.843X1+155.848X2-44.586判定雌雄斑马鱼的性别，准确率高达70%以上。斑马鱼雌性体重与体长相关性较大，且雌性个体相比于雄性具有体形较高、头部较于雄鱼略低的特征。（2）研究n-苯基硫脲（PTC）对斑马鱼的影响发现：①斑马鱼的心脏功能会随着PTC浓度增加而下降。②斑马鱼幼鱼比胚胎对PTC的耐受性更强，斑马鱼早期胚胎对PTC更为敏感。③卵膜对斑

5、马鱼胚胎具有较强的保护作用。提示我们在以后的研究中可将斑马鱼胚胎毒理实验分为两个阶段：一、破膜孵化之前，二、破膜孵化之后。或者尝试在合适的培养液中直接剥离卵膜进行实验。④本研究中0.3mM浓度组具有最佳的黑色素细胞抑制效果。⑤对黑暗组进行实验表明，斑马鱼所处的环境越黑暗，黑色素的形成就越多，建议在光相关实验中可适当加大光照。（3）由于α2ML在胚胎发育时期的表达与基因功能尚未明了，因此我们选择斑马鱼作为研究对象，以RT-PCR与原位杂交技术，分析斑马鱼α2ML在成鱼组织与胚胎中的基因表达型式。由RT-PCR结果可知，α2ML在成鱼的肝脏、肠、心脏、肌肉、卵巢、精巢和鳃中

6、均有表达。表达量大小顺序为：肝脏>肠>肌肉>精巢>心脏>鳃>卵巢。胚胎的RT-PCR实验中，α2ML只在原肠期、咽鳃期和孵化期有表达。表达量大小顺序为：咽鳃期>孵化期>原肠期。原位杂交结果表明：卵裂期1h与2.5h胚胎的胚盘上有清楚的信号表达。囊胚期3h、4h、5.3h和5.7h的整个胚胎细胞都可以看见α2ML的信号表达，5.3h和5.7h有明显的卵黄融合细胞核（YSN）表达，结果表明α2ML可能对胚胎细胞的移行有一定的作用。原肠期6h、6.5h、7h、7.5h、8h和9h整个胚胎细胞都可以看见α2ML的信号表达且均可见明显的YSN。体节生成期14h和18h胚胎在分化的

7、胚层上信号不明显且透明，但是卵黄上的胚胎细胞及YSN表达显著。在孵化期60h和72h的胚胎中尾鳍表皮及腹部卵黄有明显表达，72h的肝脏和肠道表达明显，视网膜也可以检测到信号。在120h的幼鱼期，外部的背部、尾部、腹部和胸鳍的表皮均有较强的信号表达。内部的鱼鳔、肝脏、肠道、视网膜也可见较强信号。关键词：斑马鱼，形态学，性别鉴定，n-苯基硫脲，α2MLIPreliminaryStudyonbiologyofreproductionandα2MLgeneexpressivetypeofzebrafishAbstractThisstudywasfocusedonthewild-

8、typezebrafishmaleandfemalemorphology,expressionofmelanininhibitoronzebrafishembryonicdevelopmentandtheformationofmelaninandtheinnateimmunerelatedgenesα2ML.Themainfindingsareasfollows:(1)Establishedtheequationtoidentifymaleandfemalezebrafishbyusingstatisticalmethods:Female