慢性氟中毒大鼠骨组织中notch经典信号通路研究及与twist的关系探讨

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1、《中国图书资料分类法》单位代码：10660分类号：R363.21学号：S100081贵阳医学院2013届硕士学位论文慢性氟中毒大鼠骨组织中Notch经典信号通路研究及与Twist的关系探讨研究生：万雯导师：于燕妮教授年级：2010级专业：病理学与病理生理学2013年5月25日贵阳医学院2013届硕士研究生毕业论文目录摘要„„„„„„„„„„„„„„2前言„„„„„„„„„„„„„„4材料与方法„„„„„„„„„„„„6结果„„„„„„„„„„„„„„15讨论„„„„„„„„„„„„„„21结论„„„„„„„„„„„„„„25参

2、考文献„„„„„„„„„„„„„26英文摘要„„„„„„„„„„„„„29致谢„„„„„„„„„„„„„„31缩略词表„„„„„„„„„„„„„32论文原创性声明„„„„„„„„„„33附：综述„„„„„„„„„„„„341贵阳医学院2013届硕士研究生毕业论文慢性氟中毒大鼠骨组织中Notch经典信号通路研究及与Twist的关系探讨专业：病理学与病理生理学研究生：万雯导师：于燕妮教授【摘要】目的研究慢性氟中毒大鼠成骨细胞中Notch经典通路重要因子（Notch1、Jagged1和Hes1）及Twist蛋白和mRNA表达变化，探

3、讨该信号通路在氟骨症发生中的作用机制及与Twist的可能关系。方法36只SD大鼠随机分为3组，每组12只，组内雌雄各半。对照组饮用自﹣来水（含氟F＜0.5mg／L），低氟组、高氟组分别饮用加氟5mg/L、50mg/L的自来水。实验8个月后股动脉放血处死，采用氟离子选择电极法检测大鼠尿氟、骨氟含量。取大鼠股骨下段，HE切片观察骨组织病理学变化，并测定骨皮质厚度、骨小梁宽度等骨形态学指标。采用免疫组织化学方法测定骨组织Notch1、Jagged1、Hes1及Twist蛋白表达水平，原位杂交技术测定Notch1、Jagged1、He

4、s1及Twist的mRNA表达水平。结果（1）实验组大鼠出现不同程度氟斑牙，且高氟组重于低氟组；染氟组大鼠尿氟、骨氟含量均明显高于对照组，各组间比较差异有统计学意义(P＜0.05)，慢性氟中毒大鼠模型复制成功。(2)氟中毒组大鼠股骨出现骨皮质增厚，骨小梁宽度增加，骨密度增加等骨质硬化表现，与对照组比较，各检测指标差异有统计学意义(P＜0.05)，且随染氟浓度增加病变加重。（3）与对照组相比，染氟组大鼠成骨细胞中Notch1、Jagged1、Hes1和Twist蛋白及mRNA表达均降低，差异有统计学意义(P＜0.05)；两染氟组

5、间比较，Twist蛋白及mRNA表达差异不明显。（4）相关性分析显示Notch1、Jagged1及Hes1蛋白表达水平两两呈正相关。结论过量氟可下调Notch通路重要因子（Notch1、Jagged1和Hes1）及Twist在成骨细胞中的表达，四者的低表达均对高氟环境下成骨细胞分化及骨形成的抑制作用降低。提示慢性氟中毒大鼠骨质硬化病变发生机制中Notch经典通路起着2贵阳医学院2013届硕士研究生毕业论文重要作用并可能与Twist有着协同关系。【关键词】氟中毒；骨；成骨细胞；Notch；Twist；原位杂交；免疫组化3贵阳医学

6、院2013届硕士研究生毕业论文前言氟是人体必须的微量元素之一，其化学性质活泼，能与多种元素直接合成氟化物，并以各种形式广泛分布于水，土壤，空气和动植物体中，对人类的健康有着直接的影响。然而氟的安全范围窄，不仅仅是高氟会对人体造成损害，低氟同[1]样会影响人体对重要元素钙、磷的吸收从而引起相应的疾病。在特定地区的人群，由于饮水和食物中氟含量过高，使该地区人群长期摄人过量氟而引起的慢[2]性中毒性疾病，即是地方性氟中毒（简称地氟病）。我国是地氟病流行最为严重的国家之一，由于其发病机制尚未完全阐明，部分病区人群仍处于高氟的危害中。氟

7、中毒对机体的损伤多样，临床主要表现为氟斑牙和氟骨症，其中又以氟骨症的危害最为严重，发病机制也最为复杂。近年来，随着大量动物实验和体外细胞培养的进行，已有充分依据证明成骨细胞功能活跃是一个发生较早并起主导作用的环节，在其基础上的骨转换加速是氟骨症的特征性病变，是形成骨病变多样[3-4]性的病理基础。因此，研究氟骨症的发病机制，首先就要回答在慢性氟中毒时成骨细胞是怎样被激活的。目前，骨代谢局部调控网络相关因子的作用已被作为过量氟导致成骨细胞激活主要涉及的方面之一进行深入研究。Notch信号传导通路是一条广泛存在的、保守而重要的细胞

8、间信号转导通路，[5]几乎涉及所有细胞的增殖、分化和凋亡以及一系列生理、病理过程。近来有许[6-7]多证据表明Notch信号参与了成骨细胞的分化和骨形成。当相邻细胞间的跨膜蛋白配体（Delta1、Delta3、Delta4、Jagged1、Jagged2）与同样是跨膜蛋白的[