Osterix和p38MAPK在慢性氟中毒大鼠骨损伤中的作用研究.pdf

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1、目录摘要………………………………………………………………1前言………………………………………………………………3材料与方法…………………………………………………………5结果………………………………………………………………17讨论………………………………………………………………24结论………………………………………………………………30参考文献……………………………………………………………31英文摘要……………………………………………………………36硕士学习期间完成及参与发表的文章……………………………38致谢……………………………………………

2、…………………39略缩词表……………………………………………………………40论文原创性声明……………………………………………………41附录一………………………………………………………………42综述一………………………………………………………………43综述二………………………………………………………………51Osterix和p38MAPK在慢性氟中毒大鼠骨损伤中的作用研究专业：病理学与病理生理学研究生：杨丹导师：于燕妮教授【摘要】目的：在氟中毒动物模型复制的基础上，观察不同剂量氟对SD大鼠股骨成骨细胞的影响，检测氟对成骨细胞特异性转录因子Ost

3、erix（OSX）基因及其蛋白表达的影响；同时检测丝裂原活化蛋白激酶(mitogenactivatedproteinkinasecascsde,MAPK)/p38信号通路的变化，分析p38MAPK信号通路改变与慢性氟中毒骨相损害的关系，探讨其在慢性氟中毒骨损伤发病机制中的作用。方法：SD大鼠随机分为5组（每组12只，雌雄各半），即对照组、低氟组、高氟组、高氟+SB203580组和高氟+DMSO组；低氟组饮水含氟5mg/L，高氟组、高氟+SB203580组和高氟+DMSO组饮水含氟50mg/L，复制不同摄氟剂量的慢性氟中毒大鼠模型，试验期为8个

4、月。高氟+SB203580组大鼠腹腔注射p38MAPK特异性阻断剂SB203580；高氟+DMSO组大鼠腹腔注射二甲基亚砜（Dimethylsulfoxide，DMSO）。3天后结束实验。实验结束时用ELISA方法测定血清中骨转换指标的变化；用HE染色观察实验大鼠骨组织形态变化、免疫组化检测OSX及p38在骨组织中的表达情况；实时荧光定量PCR（Real-timePCR）检测OSX、p38的基因表达水平。结果：成功复制氟中毒大鼠模型，表现为染氟组有不同程度的氟斑牙发生，以高剂量组最为严重，差异有统计学意义（P＜0.05），对照组无氟斑牙形成；

5、与对照组相比，染氟组尿氟和骨氟含量均增加，差异有统计学意义（P＜0.05）；且呈剂量效应关系。骨形成指标骨碱性磷酸酶（BALP）ELISA结果表明，与对照组相比，低氟组和高氟组血清BALP和抗酒石酸酸性磷酸酶-5b（TRACP-5b）含量均明显增加，差异有统计学意义（P＜0.05），与低氟组相比，高氟组大鼠血清BALP含量升高，TRACP-5b含量降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。骨组织第1页HE染色形态学观察发现，各染氟组大鼠均表现为骨质硬化。免疫组化和Real-timePCR结果显示：与对照组比较，各染氟组OSX和p38蛋白和mRA

6、N表达增高，p-p38蛋白表达增加，差异有统计学意义（P＜0.05）；与高氟组和高氟+DMSO组比较，高氟+SB203580组p-p38蛋白表达减少，OSXmRAN表达增高，差异有统计学意义（P＜0.05），p38蛋白和mRAN表达无明显变化。结论：过量氟可引起成骨与破骨活动增强的骨转换增高状态，并可通过OSX表达影响骨形成程度；氟中毒时骨损伤的发生可能与p38MAPK信号通路的过度激活有关。【关键词】：氟中毒；大鼠；骨组织；OSX；p38MAPK第2页前言氟是人体必需的一种微量元素，适量的氟对人体具有重要的生理功能，但长[1]期摄入过量的氟

7、则可能引起慢性全身中毒性病变，即慢性氟中毒。地方性氟中毒(endemicfluorosis，简称地氟病)是由于地球化学因素是当地岩石、土壤、饮水中含氟量过高，导致人体摄入氟过多而发生的全身性中毒改变。我国地氟病病区大致可分为饮水型地氟病病区、燃煤型地氟病病区和饮茶型地氟病病区三类。我国是地方性氟中毒流行最为严重的国家之一，据2010年初卫生部调查报告，全国共有饮水型病区县1108个，病区村10余万个，受威胁人口9200多万人。成人每天吸收的氟约有50%经尿排出，汗液和粪便也可以排泄一定量的氟，[2]其余主要结合于骨骼和牙齿中，所以地方性氟中毒

8、损伤各个系统的器官组织，但是尤以损伤骨骼和牙齿最为严重，主要表现为氟斑牙和氟骨症；此外氟中毒还可导致心血管、中枢神经、消化、内分泌、视器官、皮肤等多系统的全身性疾病