can和nfat蛋白及其mrna在慢性氟中毒大鼠骨组织中的表达意义

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1、贵阳医学院2012届硕士研究生论文《中国图书资料分类法》单位代码:10660分类号:R361学号:S090048贵阳医学院2012届硕士学位论文CaN和NFAT蛋白及其mRNA在慢性氟中毒大鼠骨组织中的表达意义研究生:谢莹导师:于燕妮教授年级:2009级专业:病理学与病理生理学2012年5月28日贵阳医学院2012届硕士研究生论文目录摘要………………………………………………………………1前言………………………………………………………………3材料与方法…………………………………………………………5结果………………………………………………………………18讨论………………

2、………………………………………………25参考文献……………………………………………………………32英文摘要……………………………………………………………35致谢………………………………………………………………37略缩词表……………………………………………………………38论文原创性声明……………………………………………………39附:综述…………………………………………………………40贵阳医学院2012届硕士研究生论文CaN和NFAT蛋白及其mRNA在慢性氟中毒大鼠骨组织中的表达意义专业:病理学与病理生理学研究生:谢莹导师:于燕妮教授摘要目的:探讨CaN/NFAT信号通

3、路在慢性氟中毒氟骨症发病中的作用。方法:将36只SD大鼠按性别和体重随机分为3组:对照组(饮水含氟<0.5mg/L)、低氟组(饮水含氟5.0mg/L)、高氟组(饮水含氟50.0mg/L),每组12只。实验8个月后股动脉放血处死大鼠,氟离子选择电极法检测尿氟、骨氟含量;收集血清,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测骨钙素(BGP)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP5b);HE染色光镜观察实验大鼠骨组织形态改变;抗酒石酸酸性磷酸酶染色(TRAP)鉴定破骨细胞(Osteoclast,OC)并计数;取大鼠股骨下端,用免疫组织化学法和原位杂交检测各组大鼠股骨组织中CaN和NFAT

4、蛋白及mRNA表达。结果:1.氟中毒大鼠模型复制成功,表现为染氟组大鼠有不同程度氟斑牙发生,以高剂量组最为严重,各组间比较,差异有统计学意义(P<0.05),对照组无氟斑牙形成;与对照组比较,低、高剂量氟中毒组尿氟、骨氟含量明显升高,各组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。2.ELISA结果显示:(1)染氟组大鼠血清BGP升高,各组间比较,差异有统计学意义(P<0.05);(2)与对照组比较,低氟组大鼠血清TRACP5b含量增加显著(P<0.05),高氟组与对照组比较无统计学意义,但与低氟组比较降低(P<0.05)。3.病理形态学观察发现骨组织呈骨质硬化表现,

5、与对照组比较,随染氟剂量增加,氟中毒组大鼠骨小梁厚度、密度及骨皮质厚度均明显增加,骨小梁间隙逐渐减小,差异有统计学意义(P<0.05)。4.破骨细胞的鉴定与计数:对照组比较,低氟组破骨细胞数目增加,差异有统计学意义(P<0.05);高氟组破骨细胞数目与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);低氟组与高氟组间差异有统计学意义(P<0.05)。5.免疫组化和原位杂交结果显示:(1)与对照组比较,染氟组大鼠成骨细胞1贵阳医学院2012届硕士研究生论文中CaN和NFAT蛋白及mRNA表达逐渐增高,各组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)与对照组比较,低氟组

6、大鼠破骨细胞中明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),而高氟组与对照组比较,CaN和NFAT蛋白及mRNA表达无明显差异(P>0.05)。成骨细胞和破骨细胞中,CaN表达与NFAT的表达均呈正相关性(rOB=0.923,rOC=0.984,P<0.05)。结论:饮水型慢性氟中毒大鼠模型复制成功。BGP、TRACP5b可作为慢性氟中毒骨骼病变的代谢指标之一。慢性氟中毒大鼠骨组织中CaN和NFAT表达出现改变,经由CaN/NFAT信号通路参与氟中毒骨骼损伤,可能是氟骨症发病机制的重要环节之一。关键词:慢性氟中毒;大鼠;成骨细胞;破骨细胞;CaN;NFAT2贵阳医学院

7、2012届硕士研究生论文前言氟是人类生命活动所必需的微量元素之一,生理剂量的氟对人体具有重要的生理功能,但长期过量摄入可导致慢性全身性氟中毒改变,即慢性氟中毒。氟中毒是在特定的地区,由于地理环境、生活方式等因素的影响,该病出现一定的地方聚集性,因此又称为地方性氟中毒,简称地氟病。地氟病涉及人口众多,几乎遍及五大洲50多个国家和地区,在发达国家危害较轻,或接近消除,而在亚洲、[1]非洲一些发展中国家则流行较重,我国是地氟病流行最为严重的国家之一。地氟病是一种生物地球化学性疾病,呈世界性广泛分布。氟中毒对机体各系统均具有毒性作用,主要分为骨相损害和非骨相损害,其中以

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