干扰素诱导基因ifit家族分子促进i型干扰素抗肿瘤作用及其机制研究

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1、学校代码：学号：10023200501053干扰素诱导基因IFIT家族分子促进I型干扰素抗肿瘤作用及其机制研究专业年级：北京协和医学院临床医学专业2005级姓名：杨莹韵导师：曹雪涛(教授)白春梅(教授)北京协和医学院基础学院免疫学系北京协和医学院临床学院肿瘤内科完成日期：2013年6月目录英文缩略词⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7正文干扰素

2、诱导基因IFIT家族分子促进I型干扰素抗肿瘤作用及其机制研究⋯91引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一91．1干扰素治疗在病毒感染性疾病和恶性肿瘤中的应用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯91．2干扰素通路及其调控⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．101．2．1JAK．STAT通路的负向调控蛋白⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯121．2．2JAK．STAT通路的正向调控蛋白⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯151．3IFIT家族分子及其作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．161．3．1IFI

3、T家族分子的基因结构⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯171．3．2IFIT家族分子的蛋白结构⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯171．3．3IFIT家族分子间的相互作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯191．3．4IFIT家族分子的抗病毒作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l91．3．5IFIT家族分子与肿瘤⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯221．3．6IFIT家族分子参与影响IFN产生⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．221．4本研究工作的目的⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．232实验材料、试剂与方法⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一242．1实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．242．1．1实验动物⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯242．1．2细胞系⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯242．1．3组织样本⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯242．1．4载体、菌株与分子克隆试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯242．1．5主要试剂与抗体⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯252．1．6主要设备及软件⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯262．2实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一262．2．1细胞培养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯262．2．2细胞siRNA干扰⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯263452．2．3细胞总RNA的提取，cDNA的制备和定量PCR⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．272．2．4MTT试验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．292．2．5细胞周期同步化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯292．2．6细胞周期检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯292．2

6、．7细胞凋亡检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯292．2．8Westernblot检测细胞胞浆蛋白⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．302．2．9表达载体的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯302．2．10细胞质粒转染⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一322．2．11免疫共沉淀⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．332．2．12荷瘤裸鼠体内实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯332．2．13统计学分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．33结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

7、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯343．1IFN．0【刺激诱导IFIT家族分子的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．343．2IFIT家族分子在人肝细胞肝癌(HCC)中表达下调⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯343．3IFIT家族分子促进IFN．cc对HCC的抑制作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯363．3．1IFIT家族分子siRNA干扰效率的验证⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．363．3．2IFIT家族分子增强IFN一仪诱导的HCC细胞增殖抑制作用⋯⋯⋯⋯363．3．3IFIT家族分子促进IFN—Ot诱导的HCC

8、细胞周期阻滞⋯⋯⋯⋯⋯⋯403．3．4IFIT家族分子增强IFN．0【诱导的HCC细胞凋亡⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯423．4IFIT家族分子促进IFN．u所诱导的下游ISG表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．423．5IFIT家族分子促进IFN下游STATl和STAT2的磷酸化活化⋯⋯⋯⋯．453．6IFIT家族分子通过结合STATl和STAT2进而影响IFN下游信号⋯⋯463．7IFIT家族分子与STAT