干扰素刺激基因i6（isg16）的克隆表达及其对丙型肝炎病毒和i型干扰素信号通路的影响研究

《干扰素刺激基因i6（isg16）的克隆表达及其对丙型肝炎病毒和i型干扰素信号通路的影响研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、也，京碱如皆ｆ從中因聲３刮等巧＞硕±研究生学位论文北京协和医学院研究生院学校代码：１００２３学号：Ｓ２０１２０１９０１０硕ｉｔ学位论文干挑素刺激基因１６（巧Ｇ１６）的克隆表达及其巧丙型肝炎病毒和Ｉ型干犹素倍号通路的影日向研究所院：输血研究所姓名：陈珊指导教师：陈利民教授导师小组；李世林副教授何苗副教授学科专业：病原生物学研究方向：丙肝病毒耐药及免疫逃逸机制完成日期：２０１５年５月中国医学科学院北京协和医学院硕主研巧生学位论文目录１摘

2、要ＡＢＳＴＲＡＣＴ３前言５１丙型肝炎病毒研巧现状５２干扰素刺激基因１６８３本研巧的目的与意义９４１０本研究的技术路线实验材料１３１主要实验仪器及耗材１３２常用王具酶和试剂１４３菌株及培养基１５４细胞及培养基１５５转染质粒及载体１６６ＲｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ＾Ｍ＾１８７常用试剂配制方法１８８主要试剂及来源用途２０实验方法２２一投Ｇ２２第部分１６基因的克隆和表达载体的构建１ＩＳＧ１６基因目的片段的获得２２２

3、目的片段与测序载体连接验证片段正确性．．．２５３目的片段与表达载体连接２７二－－第部分重组质粒ｐｃＤＮＡ３．１３ｘｔａｇＩＳＧ１６的真核表达验证２９－ｘ－１重ｃＤＮＡ３ａ６组质粒ｐ．１３ｔｇＩＳＧ１大量提取２９２细胞株复苏和培养化及转染体系建立３０ｘ－ｃＤＮＡ３－３重组质粒ｐ．１３ｔａｇＩＳＧ１６的真核表达验证３２ｃＤＮＡ３－ｘ－第云部分重组质粒ｐ．１３ｔａｇＩＳＧ１６对丙型肝炎病毒（Ｕ及干扰素信号通路的影响３６！ＦＮ－ａ抗病毒作用的影响１投Ｇ１６对丙型肝炎病毒复制Ｗ

4、及％２投Ｇ１６对干扰素信号通路的影响３７第四部分投Ｇ１６在丙型巧炎病人外周血单核细胞ＰＢＭＣｓ中的表达３８１丙型肝炎病人外周血标本采集３８１中国医学科学院北京协和医学院硕±研究生学位论文２ＰＢＭＣｓ的分离扣３ＰＢＭＣｓ培养和处理３９ｅａｍｅ－４总ＲＮＡ提取和ＲｌｔｉＰＣＲ检测巧实验结Ｈ４０ｃ－ｘａ－Ｇ１ＤＮＡ３．１３ｔＩＳ１６质粒构建４０ｐｇ２ｃＤＮＡ３－ｘａ－投Ｇ１．１３ｔ６在肝癌细胞系中的高表达４２ｐｇ－ａ３投Ｇ１６对ＨＣＶ复制Ｗ及

5、！ＦＮ抗病毒作用的影响４３４ＩＳＧ１６对Ｉ型干犹素信号通路的影响４４５技Ｇ１６在慢性丙型肝炎患者ＰＢＭＣｓ中的表达水平与干扰素治疗疗效的相关性ｍ％４７巧论４８Ｓ＾５１ｍ录５２参考文献５４：＾：献综述５８个人简Ｍ６９致Ｗ７０独创性声明７１学位论文版权使ｍ授权书７１２中国医学科学院北京协和医学院硕±研巧生学位论文干扰素刺激基因１６（ＩＳＧ１６）的克隆表达及其对两型肝炎病毒和Ｉ型干扰素信号通路的影响研究摘要ｅａ一ｔ

6、ｔｓｓ背景；丙型肝炎病毒（ＨｐｉｉＣＶｉｍ，ＨＣＶ）引起的慢性丙型肝炎是种严重的传染性肝脏疾病１．５ＨＣＶ，２０％，目前全球感染者约亿。感染后只有的感染者可Ｗ，自发清除病毒，而且ＨＣＶ感染造成的慢性化程度较高是引起肝硬化、巧纤维化一二－ｔｔＵ及肝瘤的主要原因之。丙型肝炎的标准治疗方法是聚乙醇干扰素（ｐｅｇｙｌａｅｄ－ｔＰＥＧＩＦｒ民ＢＶｉｎｅｒｆｅｒｏｎＮ）联合利己韦林（Ｒ化ａｖｉｉｎ，），，但是存在疗程长、费用高、副作用大等缺陷。本课题组在前期研究中使用基因芯片技术从采用干扰素治疗的丙＾

7、肝患者有效和无效病人肝组织中筛选出１８个差异表达基因，其中，在治疗无效患１（－ｔ６ｍｔｅｒｆｅｒｏｎｓｌＩ１者的治疗前的肝穿组织中ｉｍｕａｔｅｄｅｎｅ１６ＳＧ６），干扰素刺激基因ｇ，呈现高表达一。ＩＳＧ１６是最早发现的能够被Ｉ型干扰素诱导的干扰素刺激基因之，但是ＩＳＧ１６对ＨＣＶ复制Ｗ及Ｉ型干扰素信号通路的影响还没有相关研究。目的：在ＨＣＶｃｃ体外培养细胞模型（Ｈｕｈ７．５．１细胞）和ＨＣＶ复制子细胞（Ｃｏｎｌｂ细胞）中高表达ＩＳＧ１６，研究ＩＳＧ１６高表达对ＨＣＶ复制ｙＸ及Ｉ型干扰素抗病毒作

8、用的影响１６对Ｉ；６；研究ＩＳＧ型干扰素信号通路的影响研究ＩＳＧ１在经干扰素治疗后有效和无效的丙型肝炎患者外周血单核细胞（ｅｒｉｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｃｅｌｌｓｐｐ，ＰＢＭＣｓ）中的表达差异。最终阐明ＩＳＧ１６在ＨＣＶ复制ＨＣＶ活性，Ｉ型，干扰素抗干扰素信号通路及ＨＣＶ逃逸宿主先天免疫中的作用。６ｃＤ