干扰素诱导基因IFIT3在肝脏缺血再灌注损伤中的作用和机制研究.pdf

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1、分类号：R617密级：公开学校代码：11065学号：Y0115130083专业博士学位论文干扰素诱导基因IFIT3在肝脏缺血再灌注损伤中的作用和机制研究作者姓名关鸽指导教师臧运金教授专业领域外科学（肝胆血管外）培养单位医学部临床医学系答辩日期2018年5月16日干扰素诱导基因IFIT3在肝脏缺血再灌注损伤中的作用和机制研究摘要研究背景及目的：肝脏缺血再灌注损伤(hepaticischemiareperfusioninjury，HIRI)，是部分肝切除术、肝脏移植手术过程中常见的病理生理学现象，对手术的成功率和预后有重要的影响。尽管目前有关肝脏缺血再灌注损伤的相关机制研究取得了长足

2、的进步，但其具体分子机制尚未得到完全阐明。干扰素（interferon，IFN）是一类细胞因子，在机体固有免疫和调节性免疫过程中有重要作用，主要是通过调节Janus激酶-信号转导子和转录激活子（JAK-STAT）信号通路并促进干扰素诱导基因（IFN-stimulatedgenes，ISGs）的表达来实现。干扰素诱导基因，是由干扰素诱导的具有三角形四钛重复段的蛋白（Interferon-inducedproteinswithtetratricopeptiderepeats，IFIT）。干扰素诱导基因IFIT3，又叫维甲酸诱导基因G（Retinoicacid-inducedG，Rig

3、-G），被证明能够产生抗肿瘤效应，也能够通过调节免疫T细胞的增殖从而参与机体的免疫反应和进程。有报道称肝脏缺血再灌注损伤与I型干扰素信号通路密切相关，而IFIT3能反馈激活I型干扰素信号通路，但还没有相关报道研究IFIT3在肝脏缺血再灌注损伤中的作用和机制。本研究目的在于：①探讨IFIT3在肝脏缺血再灌注损伤中的作用和分子机制；②寻找肝脏缺血再灌注损伤可能存在的生物标志物和治疗靶点。研究方法：①随机选取40例在青岛大学附属医院器官移植中心进行肝移植手术的患者，于生物标本库中获取其供肝开放前后的肝组织标本，采集其术后第一次肝功能和血凝常规结果。检测供肝开放前后肝组织中IFIT3的表

4、达情况，分析其与患者术后谷丙转氨酶（alanineaminotransferase，ALT）和谷草转氨酶（aspartatetransaminase，AST）数值的相关性。将40例病人分为IFIT3高表达组和低表达组，两组行肝功能和血凝常规重要数据的比较分析。②将C57/B6小鼠分为实验组和对照组，实验组开腹后夹闭肝门血管，60min后去除血管夹，恢复肝脏血流，建立肝脏缺血再灌注损伤（HIRI）的小鼠模型。对照组实验步骤同实验组，但不夹闭肝门血管。24h后处死小鼠，下腔静脉取血，并切取肝左叶。小鼠肝脏做病理切片和HE染色并进行病理学评估和坏死区域的对比。检测两组小鼠血清中ALT和

5、AST的水平并进行分析，检测两组小鼠肝脏中IFIT3mRNA和蛋白的表达水平并进行分析。将C57/B6小鼠分为三组，第一组（对照组）小鼠只进行开腹和关腹手术；第二组（实验组，siNC组）小鼠在尾静脉注射siNC慢病毒（无关基因敲低）的基础上建立HIRI的小鼠模型；第三组（实验组，siIFIT3组）小鼠在尾静脉注射siIFIT3慢病毒（靶I向敲低IFIT3）的基础上建立HIRI的小鼠模型。获取小鼠的肝组织及血液标本。检测三组小鼠肝脏中IFIT3mRNA的表达水平并进行分析；小鼠肝脏进行病理切片和HE染色，三组小鼠进行坏死区域比较和面积的计算并进行分析；检测三组小鼠血清中ALT和AS

6、T的水平并进行分析；检测三组小鼠肝脏组织中，炎症因子白介素1β(IL-1β)、白介素6（IL-6）和肿瘤坏死因子α(TNFα)mRNA和蛋白的表达水平并进行分析。③选取小鼠巨噬细胞细胞株RAW246.7细胞，利用矿物油来构建缺糖缺氧/复糖复氧（hypoxiareoxyg，HR）细胞模型。设置三组细胞，第一组（对照组）不进行任何处理；第二组（实验组，siNC组）在用siNC慢病毒（无关基因敲低）转染的基础上建立HR细胞模型；第三组（实验组，siIFIT3组）在用siIFIT3慢病毒（靶向敲低IFIT3）转染的基础上建立HR细胞模型。检测三组细胞中IFIT3mRNA和蛋白的表达水平并

7、进行分析，分别检测三组细胞和细胞上清中，炎症因子IL-1β、IL-6和TNFαmRNA和蛋白的表达水平并进行分析。④照上述实验方法，再次构建小鼠模型和细胞模型。小鼠模型中，检测肝脏中干扰素信号通路诱导基因MX1、CXCL10和ISG15mRNA的表达水平并进行分析；细胞模型中，检测细胞中MX1、CXCL10和ISG15mRNA的表达水平并进行分析。结果：①在选取的40例肝移植患者中，缺血再灌注后肝组织标本中IFIT3的表达水平明显高于再灌注之前IFIT3的表达水平（P<0.001