川芎嗪对大鼠急性脊髓损伤中mirna-24和bim蛋白表达的影响

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1、中图分类号UDC博士学位论文学校代码密级川芎嗪对大鼠急性脊髓损伤中miRNA．24和Bim蛋白表达的影响TheinfluenceofTMPtotheexpressionofmiRNA··24andBimintheratacutespinalcordinjury作者姓名：王冠学科专业：临床医学八年制研究方向：脊柱外科学院(系所)：湘雅医学院指导教师：胡建中教授吕红斌教授论文答辩日期丝!兰：兰：乡答辩委员会主席中南大学2013年5月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特NDi：i以标

2、注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。作者签名：圭亟日期：旦年三月鲨日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会

3、公众提供信息服务。作者躲监导师签羞乒吼丝年二当摘要川芎嗪对大鼠急性脊髓损伤中miRNA．24和Bim蛋白表达的影响第一章绪论急性脊髓损伤(acutespinalcordinjury,ASCI)是一类由外伤所引起的具有高致残性的中枢神经创伤，近年来其发病率一直居高不下。脊髓损伤可以分为原发性损伤和继发性损伤两大类。目前国际上的研究重点都放在如何减少继发性损伤，促进脊髓功能的恢复。miRNA是广泛存在于生物体内的小分子RNA，在生命活动中具有广泛的调节作用。有研究发现具有抑制细胞凋亡作用的miRNA一24参与了急性脊髓损伤的病理过程。本课题组也在前期的

4、研究中发现miRNA．24的表达在SCI后明显改变，但其在SCI中的具体作用和机制并不明确。川芎嗪(Tetramethylpyrazine，TMP)化学名为四甲基吡嗪，是一种从川芎中发现的生物活性单体，在治疗心血管疾病方面具有确切的作用。近年来关于川芎嗪的研究发现它在急性脊髓损伤后具有保护脊髓功能的作用，其在SCI中的作用机制还需要进一步研究。为此，本研究以大鼠急性脊髓损伤模型为基础，结合分子生物学技术检测miRNA．24、Bim蛋白的表达以及细胞凋亡的情况，探讨大鼠SCI中miRNA．24、Bim和细胞凋亡的关系，分析TMP对miRNA一24和B

5、im的影响，为SCI的临床治疗提供科学理论依据。第二章SCI中miRNA-24、Bim和细胞凋亡的关系目的通过检测SCI后miRNA．24、Bim的表达已经细胞凋亡的情况，分析大鼠急性脊髓损伤中miRNA．24、Bim和细胞凋亡的关系。方法选用48只成年雄性SD大鼠，分为正常对照组(n=12只)和脊髓损伤组(n=36只)。正常对照组仅进行椎板切除，脊髓损伤组按照ALLEN’SWD打击法建立大鼠急性脊髓损伤模型，并按时间点分11为1、3、7天三个亚组，每组12只。按时间点处死大鼠，提取大鼠脊髓损伤段，分别利用real．timePCR、免疫组织化学、T

6、unel法等分子生物学技术，检测SCI后miRNA。24、Bim的表达以及细胞凋亡的情况，验证它们在SCI后大鼠脊髓组织中的变化。采用SPSSl7．0软件对数据进行分析，对三个指标两两之问进行相关性研究，分析miRNA一24表达变化与Bim、细胞凋亡之间的关系。结果(1)大鼠SCI后，脊髓组织中miRNA一24的荧光阈值循环数(Ct值)明显升高，在第3天达到峰值，随后逐渐下降；与正常对照组相比，脊髓损伤组第l、3、7天的miRNA．24Ct值均具有统计学差异(P

7、r=0．962，P<0．01，即miRNA．24的表达与细胞凋亡存在负相关关系。(2)Bim的平均灰度值在大鼠SCI后明显降低，随后逐渐增高；正常对照组和脊髓损伤组第1、3、7天具有明显差异(P

8、24与Bim的表达存在负相关关系，Bim可能是miRNA一24参与大鼠SCI后细胞凋亡过程的重要环节。关键词急性脊髓损伤，